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IGFBP7（rP1）对肝星状细胞活化及核因子-κB活性影响的体外实验研究

作　者: 刘毅
导　师: 刘立新
学　校: 山西医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 胰岛素样生长因子结合蛋白7(相关蛋白1)(IGFBP7(rP1)) 肝星状细胞(HSC) α-平滑肌肌动蛋白(α-SMΑ) I型胶原(Collagen I) 纤维连接蛋白(FN) 核因子-κB(NF-κB p65)
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的:明确胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP7(rP1))是否具有活化肝星状细胞(HSC)及增加细胞外基质(ECM)合成与分泌的作用。方法:选择体外培养的肝星状细胞株(HSC-T6)作为研究对象,分别设立IGFBP7(rP1) 10μg/L、20μg/L、30μg/L处理组和空白对照组(加入等量磷酸盐缓冲溶液(PBS)),干预因素处理24小时后收集细胞爬片或抽提细胞胞浆蛋白,采用免疫细胞化学染色观察HSC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMΑ)、I型胶原(Collagen I)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达变化,并通过Image-Pro图像分析系统进行分析;Western Blot检测Collagen I在HSC中的表达水平,并通过Bandscan 5.0图像分析系统进行分析;同时,收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中FN的含量。结果:(1)免疫细胞化学染色结果显示:各组细胞胞浆内均可见棕黄色或棕褐色颗粒沉积,α-SMΑ、CollagenⅠ、FN呈阳性表达。经图像分析显示,IGFBP7(rP1)10μg/L组(α-SMΑ11.57±0.50、Collagen I 9.74±0.34、FN 10.54±0.67)、20μg/L组(α-SMΑ11.84±0.50、Collagen I 10.69±0.65、FN 13.99±0.72)、30μg/L组(α-SMΑ12.90±0.37、Collagen I 11.15±0.41、FN 13.32±0.70)α-SMΑ、Collagen I与FN的表达均较空白对照组(α-SMΑ7.67±0.41、Collagen I 6.82±0.47、FN 4.34±0.46)显著增强(P<0.05),且在一定范围内呈剂量依赖关系。其中α-SMΑ和Collagen I在IGFBP7(rP1)30μg/L组表达最强,FN在IGFBP7(rP1)20μg/L组表达最强。(2)Western Blot分析结果显示:95kD、43kD处分别为Collagen I与内参照(β-actin)的位置,IGFBP7(rP1)处理组可见明显的蛋白条带表达,而空白对照组Collagen I的条带较弱,经内参照(β-actin)校正后显示,IGFBP7(rP1)10μg/L组(0.7663±0.0412)、20μg/L组(0.7439±0.0720)Collagen I的表达水平较空白对照组(0.6402±0.0475)增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)ELISA检测结果显示:FN在空白对照组已有一定量的分泌,但IGFBP7(rP1)10μg/L组(3.92±0.33)、20μg/L组(5.16±0.49)、30μg/L组(4.99±0.50)FN的含量仍较空白对照组(3.40±0.19)增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)IGFBP7(rP1)可以激活体外培养的HSC,且在一定剂量范围内随着IGFBP7(rP1)剂量的增加HSC活化的程度逐渐增强。(2)IGFBP7(rP1)可使ECM的重要组成成分Collagen I和FN的合成与分泌增加。目的:明确胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP7(rP1))对HSC中NF-κB p65 DNΑ结合活性的影响。方法:选择体外培养的肝星状细胞株(HSC-T6)作为研究对象,分别设立IGFBP7(rP1) 10μg/L、20μg/L、30μg/L处理组和空白对照组(加入等量PBS),干预因素处理24小时后收集细胞并制备单细胞悬液,采用流式细胞仪检测HSC中核因子-κB p65(NF-κB p65)的DNΑ结合活性。结果:流式细胞仪检测结果显示:NF-κB p65在各组均有激活,但程度有所不同。IGFBP7(rP1)10μg/L组(72.48±7.87)、20μg/L组(81.27±7.50)、30μg/L组(68.83±7.82)NF-κB p65阳性细胞百分数均较空白对照组(48.69±2.56)显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IGFBP7(rP1)可增强HSC中NF-κB p65的DNΑ结合活性。

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肝及胆疾病 > 肝硬变
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