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SV40Tag转基因大鼠胰岛细胞瘤模型的建立、鉴定以及发病机理的初步研究
作 者: 柳月琴
导 师: 孙强;张雨梅
学 校: 扬州大学
专 业: 基础兽医学
关键词: SV40Tag 胰岛细胞瘤 IRS-1 real-time PCR
分类号: R-332
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
下 载: 55次
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内容摘要
Simian Virus40(SV40)属于多瘤病毒属,是一种致瘤病毒,其早期基因编码产物大T抗原,是一种多功能调节蛋白,可以结合抑癌基因(如p53、pRb)与之相互作用,刺激DNA的复制,从而促进细胞的增值,引起正常细胞发生转化。利用这一特性,建立了大量的肿瘤转基因动物模型,包括胰腺癌、骨肉瘤、膀胱癌、肝癌等。而关于SV40Tag的转基因胰岛细胞瘤模型报道较少。胰岛细胞瘤也称胰腺内分泌肿瘤,临床上多出现低血糖症状,但是此症状并不特异,并且由于其位置隐匿,多在晚期发现,并已经激发产生多种病症,早期诊断,治疗十分困难,所以关于胰岛细胞瘤的相关研究也较少,目前其发病机理尚不完全清楚。本研究通过SV40Tag转基因大鼠的建立,以期得到可稳定遗传的胰腺瘤大鼠,为胰腺瘤的深入研究以及SV40Tag致瘤机理的研究提供大量的动物模型。利用pBC-SV40Tag重组质粒对SD大鼠进行雄原核显微注射,经PCR、RT-PCR和Western Blotting检测证实获得了阳性转基因大鼠,80%SV40Tag阳性转基因大鼠在6~9月龄出现胰腺肿瘤。通过解剖、组织病理学、免疫组织化学分析以及临床血糖测试,证明该肿瘤源自胰腺的胰岛细胞,与人的胰岛素细胞瘤极为相似,确定为胰岛细胞瘤。根据本实验室早期相关研究结果,利用real-time PCR以及免疫共沉淀结合Western Blotting对该肿瘤模型中IGF-IR信号通路上的重要蛋白IRS-1进行分析,发现其与SV40Tag存在相互作用,在SV40Tag表达的细胞中,异常增加,并且随SV40Tag进入细胞核中。综上所述,本研究成功建立了SV40Tag转基因大鼠,得到了类似于人的胰岛细胞瘤模型,并对其发病机理进行了初步探讨,这将对SV40Tag的致瘤机理的研究以及胰岛细胞瘤的预防、临床诊断以及治疗具有重要作用。
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全文目录
中文摘要 3-5 Abstract 5-9 符号说明 9-10 文献综述 10-19 第一章 SV40Tag 转基因大鼠模型的建立 19-31 1 材料 19-20 2 方法 20-26 3 结果 26-29 3.1 pBC-SV40Tag 显微注射用基因片段的制作 26-27 3.2 转基因大鼠基因整合检测结果 27-28 3.3 阳性鼠繁殖情况 28 3.4 F1 代阳性鼠SV40Tag 表达检测结果 28-29 4 讨论 29-31 第二章 SV40Tag 转基因大鼠胰腺瘤的鉴定 31-40 1 材料 31-32 2 方法 32-33 3 结果 33-38 3.1 阳性大鼠发瘤情况结果 33-34 3.2 组织病理学分析 34 3.3 胰腺瘤SV40Tag 免疫组织化学分析结果 34-38 3.4 阳性大鼠血糖分泌结果分析 38 4 讨论 38-40 第三章 SV40Tag 转基因大鼠胰岛细胞瘤发病机制初步研究 40-48 1 材料 40-41 2 方法 41-43 3 结果 43-46 3.1 real-time PCR 结果 43-45 3.2 双色免疫荧光结果 45 3.3 免疫共沉淀和 Western Blotting 结果 45-46 4 讨论 46-48 结论 48-49 参考文献 49-55 致谢 55-56 攻读学位期间发表的文章 56-57
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中图分类: > 医药、卫生 > 医学研究方法 > 实验医学、医学实验 > 医用实验动物学
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