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两种尸食性蝇类幼虫血淋巴可溶性蛋白组成的时间特征

作　者: 高亚坤
导　师: 张孟余；李泽民
学　校: 河北医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 法医昆虫学丝光绿蝇大头金蝇死后间隔时间体重血淋巴蛋白质电泳生长发育
分类号: D919
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 34次
引　用: 3次
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内容摘要

目的:研究石家庄地区夏秋季优势蝇种丝光绿蝇Lucilia sericata和大头金蝇Chrysomya megacephala的生长发育规律,探讨不同温度条件下两种蝇类幼虫体重、血淋巴可溶性蛋白的含量及组成随日龄的变化规律,为法医学推断死后间隔时间(PMI)提供理论依据。方法:从自然界诱捕两种成蝇,带回实验室连续饲养,取第三代成蝇作为母代,在生化培养箱内进行发育试验,温度设定为24℃、28℃、32℃,湿度为50%~60%,光周期为12h:12h。以刚孵化的幼虫为0日龄,从1日龄开始取样,每隔24h取样一次,直至50%以上幼虫入土化蛹。体重标本的留取:每次留取不同蝇种的幼虫10头。用80℃的热水烫死后取出用滤纸吸干多余水分,放入70%的甘油酒精中保存。从70%的甘油酒精保存液中取出幼虫标本,用滤纸吸干后用电子天平称取各温度下不同蝇种不同日龄幼虫的体重。血淋巴样品的留取:每次取不同蝇种的幼虫60头,以75%酒精清洗两次,冰蒸馏水清洗数次,用滤纸吸干后放在载玻片上用解剖针小心刺破幼虫的体壁,毛细吸管吸取流出的血淋巴滴入冰浴离心管中,以10000r/min低温离心10min,取出上清液,置于-20℃冰箱保存备用。用722S可见分光光度计测定不同温度下两种蝇类各日龄幼虫血淋巴蛋白质的吸光度,根据Bradford法计算蝇幼虫血淋巴蛋白质的含量。用SDS-PAGE电泳的方法对血淋巴蛋白进行分离;用FR-980生物电泳图像分析系统对各条蛋白带进行电泳分析;将分析结果用SPSS11.5和EXCEL进行统计分析和作图,处理图片用PHOTOSHOP软件。结果:1两种蝇类幼虫期体重,血淋巴蛋白质含量随发育变化的时间特征各温度条件下幼虫体重在发育初期随着日龄的延长而显著增加,到达最大值后随着日龄的延长而稍有降低。24℃、28℃、32℃下丝光绿蝇幼虫体重达到最大值的时间分别为5日龄、4日龄、4日龄;大头金蝇为5日龄、4日龄、3日龄。蝇类幼虫体重随日龄的变化趋势可以用三项式曲线Y=b0+b1X+b2 X2+b3X3拟合,拟合效果较好。各温度下两种蝇类幼虫血淋巴蛋白质的含量随着日龄的延长而增加,在发育初期增长迅速,某一时间达到最高值后随着日龄的延长有所下降。24℃、28℃、32℃下,丝光绿蝇幼虫血淋巴蛋白质含量达到最大值的时间为5日龄、4日龄、4日龄;大头金蝇为4日龄、4日龄、3日龄。蝇类幼虫血淋巴蛋白质含量随日龄的变化趋势可以用三项式曲线Y=b0+b1X+b2 X2+b3X3拟合,拟合效果较好。2温度对两种蝇类幼虫体重,血淋巴蛋白质含量变化的影响各温度条件下,蝇类幼虫体重在发育初期随着日龄的延长而显著增加,到达最大值后,随着日龄的延长其体重稍有降低。但幼虫体重达到最大值的时间随着温度的升高而缩短。各温度条件下,蝇类幼虫血淋巴蛋白质的含量在发育初期随着日龄的延长而显著增加,到达最大值后,随着日龄的延长其含量有所降低。但随着温度的升高,蝇类幼虫血淋巴蛋白质含量达到最大值的时间缩短。3两种蝇类幼虫血淋巴可溶性蛋白组成的时间特征24℃、28℃、32℃下,两种蝇类幼虫血淋巴中均出现了13条清晰可见的蛋白带,分别是A带(230KDa)、B带(79KDa)、C带(73KDa)、D带(46KDa)、E带(40KDa)、F带(37KDa)、G带(31KDa)、H带(丝光绿蝇28KDa,大头金蝇27KDa)、I带(丝光绿蝇27KDa,大头金蝇22KDa)、J带(丝光绿蝇22 KDa,大头金蝇18KDa)、K带(丝光绿蝇18KDa,大头金蝇17KDa)、L带(13KDa)、M带(11KDa)。这些蛋白带的蛋白含量随日龄的延长均呈规律性的变化。其中,A带(230KDa),(B+C)带,G带(31KDa)的含量变化差异较为显著。这些蛋白带在幼虫各日龄间含量的差异具有应用于蝇类幼虫日龄推断的价值。对血淋巴可溶性蛋白A带(230KDa)的含量用Y=a+bX直线拟合其与日龄的关系,拟合效果较好。结论:1不同温度条件下丝光绿蝇,大头金蝇幼虫体重随着日龄的延长而增加,到达最大值后有所降低。但随着温度的升高其体重增加的速率加快,到达最大值的时间缩短,到达最大值后,温度越高,其体重下降的越快。2不同温度条件下丝光绿蝇,大头金蝇幼虫血淋巴蛋白质含量随着日龄的延长而增加,到达最大值后有所降低,但随着温度的升高其含量增加的速率加快,到达最大值的时间缩短,到达最大值后,温度越高,其血淋巴蛋白的含量下降的越快。3两种蝇类幼虫血淋巴中均含有13条清晰可见的蛋白带。各条蛋白带随着日龄的延长呈现规律性变化。其中,A带(230KDa),B+C带,G带(31KDa)的含量差异较为显著,具有应用于推断法医学死后间隔时间的价值。

两种尸食性蝇类幼虫血淋巴可溶性蛋白组成的时间特征

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