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多效生长因子Pleiotrophin对Schlafen2基因表达的影响及其调控机制的研究

作　者: 方玲
导　师: 刘昕；潘兴斌
学　校: 兰州大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 多效生长因子基因沉默 Schlafen2 基因表达 IL-1 JNK信号通路
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:在多效生长因子(Pleiotrophin,Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中,研究Pleiotrophin对Schlafen2(Slfn2)基因表达的影响,以及在此调控过程中可能涉及的细胞因子;探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路。方法:前期研究发现,多效生长因子(Pleiotrophin,Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中Schlafen2(Slfn2)基因高表达。在本实验中,(1)为了验证Ptn是否可能通过调控某种分泌型因子来抑制Slfn2表达,用Ptn稳定沉默细胞的培养液培养对照NC细胞,通过Northern杂交法检测培养不同时间后NC细胞中Slfn2表达水平变化,同时应用RT-PCR检测Ptn沉默细胞内IL-1a和IL-1f6表达水平,以及外源性PTN因子(终浓度50ng/μl)对Ptn沉默细胞内IL-1表达水平的影响;分别使用重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-lra)和IL-1a中和抗体阻断IL-1的作用通路,检测Ptn稳定沉默细胞中Slfn2基因表达变化。(2)为了探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路,应用Western印迹检测Ptn沉默细胞及NC细胞JNK磷酸化基础水平,以及外源性PTN因子(终浓度50 ng/μl)对Ptn沉默细胞JNK磷酸化水平的影响;用SP600125和SB203580特异性阻断JNK和p38通路,Northern印迹分析Ptn沉默细胞Slfn2基因转录水平的变化。(3)为了进一步验证Ptn沉默细胞内表达上调的IL-1是否也对JNK通路具有调控作用,分别使用重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-lra)和IL-1a中和抗体阻断IL-1的作用通路,应用Western印迹检测Ptn稳定沉默细胞中JNK磷酸化水平的变化。结果:(1)Ptn沉默细胞中Slfn2表达显著上调,Ptn沉默细胞培养液可以诱导对照细胞Slfn2表达;Ptn沉默后细胞内IL-1a和IL-1f6表达显著上调,外源性PTN能抑制沉默细胞中IL-1a和IL-1f6的表达;IL-1受体拮抗剂(rhIL-lra)和IL-1a中和抗体可抑制Ptn沉默细胞中Slfn2表达。(2)Ptn沉默诱导细胞内磷酸化JNK蛋白高表达,此诱导效应可被外源性PTN抑制;阻断JNK通路呈时间依赖性抑制Ptn沉默细胞中Slfn2基因表达;阻断p38通路对Ptn沉默细胞中Slfn2表达水平没有明显影响。(3)IL-1受体拮抗剂(rhIL-1ra)和IL-1a中和抗体可抑制Ptn沉默细胞中JNK磷酸化水平。结论:(1)Ptn对Slfn2基因表达具有负性调控作用,在此调控过程中IL-1家族是其中一种非常重要的调控因子。(2)Ptn可能通过抑制其下游JNK/MAPK通路来负调控Slfn2的表达。(3)Ptn沉默细胞内表达上调的IL-1也对JNK/MAPK通路具有调控作用

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
缩略词表  8-10
目录  10-11
前言  11-14
材料和方法  14-26
  1 材料  14-16
  2 方法  16-26
结果  26-32
讨论  32-38
结论  38-39
参考文献  39-44
综述  44-51
在学期间的研究成果  51-52
致谢  52

多效生长因子Pleiotrophin对Schlafen2基因表达的影响及其调控机制的研究

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