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玉屏风散药材、血清指纹图谱及部分成分药动学研究
作 者: 陈伟薇
导 师: 李俊
学 校: 安徽医科大学
专 业: 药剂学
关键词: 玉屏风散 HPLC 指纹图谱 血清 药物代谢动力学 峰浓度/峰面积-时间曲线图 房室模型
分类号: R282
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
玉屏风散是中医“扶正固本”的经典代表名方,在近代临床医疗中被广泛应用于与免疫功能失调有关的多种疾病的治疗,但由于该方成分复杂,原标准尚未建立含量测定方法,仅凭借其中某一种或少数几种化学成分定性或定量的传统中药质量评价方法降低了鉴别的准确性和专属性,而指纹图谱分析方法的出现为玉屏风散及其各单方药材的质量提供了可靠的保证。中药指纹图谱通常是指借助于现代分析及检测技术来表达植物药(主要是次生代谢产物)化学信息特征的指纹图谱。它是一种十分可行的质量控制模式,运用整体性与模糊性的基本属性,即物种特征的唯一性和同种个体间的相似性,为中药材和中成药提供综合的、宏观的和可量化的质量评价[1,2]。它包括色谱指纹图谱、光谱指纹图谱、高效毛细管电泳指纹图谱、核磁共振指纹图谱、质谱指纹图谱的、X-射线衍射指纹图谱和DNA指纹图谱等,其中又以HPLC色谱法研究的指纹图谱居多,它以其应用的广泛性、优良的分离能力和检测的精确性成为控制中药质量最主要的检测方法。本实验按照《中国药典》(2005年版)规定及《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中的相关规定,优化高效液相色谱的分离条件,建立了玉屏风散全方药材汤剂的HPLC指纹图谱,同时建立了血清指纹图谱以及部分成分的药代动力学。本文研究的具体内容包括以下两个部分:1.玉屏风散药材汤剂的HPLC指纹图谱的建立本实验初步对玉屏风散药材进行了指纹图谱研究,建立了玉屏风散药材的高效液相色谱指纹图谱的研究方法。实验比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2%磷酸水和乙腈-0.2%磷酸等流动相体系及不同波长对玉屏风全方药材汤剂的分离效果的影响,并采用梯度洗脱对色谱条件进行优化,以升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花素为指标,制定了全方药材汤剂的HPLC指纹图谱。确定了8个峰为指纹图谱的共有峰,以升麻苷的峰为参照峰,计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积以及各指纹图谱之间的相似度,作为技术参数评价指纹图谱。结果,实验所收集的10批不同批号和产地的药材的相似度差异很大,在某种程度上反映了各药材中有效成分含量的差异。2.血清HPLC指纹图谱的建立及部分成分的药代动力学研究在建立稳定有效的玉屏风散药材HPLC指纹图谱的色谱条件的基础上,本部分实验分别比较了蛋白沉淀法和液液萃取法处理血清样品后,建立了玉屏风散汤剂大鼠灌胃后不同时间点的血清HPLC指纹图谱。通过药材指纹图谱、空白血清指纹图谱及血清样品指纹图谱三者的比较,确定不同时间点的入血成分和含量变化趋势,旨在说明药材进入体内后的整体变化,基于此部分实验结果,具体且有针对性地对其中某些有特征变化的色谱峰进行药代动力学研究。确定了升麻苷峰的药动学参数,同时进行房室模型拟合,绘制出升麻苷的峰浓度—时间曲线图,以及未知峰①的峰面积—时间曲线图,为玉屏风散药效物质基础的系统研究积累药动学实验资料。以上结果综合表明,本实验初步建立了玉屏风散全方药材的HPLC指纹图谱,不同时间点的血清HPLC指纹图谱及某些特征峰的峰浓度/峰面积-时间变化曲线图、房室模型及药动学参数。
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全文目录
英文缩略词表 8-9 中文摘要 9-12 英文摘要 12-15 前言 15-19 参考文献 18-19 第一部分 玉屏风散药材汤剂HPLC 指纹图谱的研究 19-39 1 引言 19 2 实验材料 19-22 2.1 药品和试剂 19-21 2.2 仪器 21-22 3 实验方法 22-30 3.1 色谱条件 22 3.2 流动相的选择 22-28 3.3 检测波长的选择 28 3.4 玉屏风散汤剂溶液的制备 28 3.5 供试品溶液的制备 28-29 3.6 对照品溶液的制备 29 3.7 数据处理 29 3.8 方法学考察 29-30 3.8.1 精密度考察 29 3.8.2 稳定性考察 29 3.8.3 重复性考察 29-30 4 实验结果 30-35 4.1 方法学考察结果 30-32 4.1.1 精密度实验考察结果 30 4.1.2 稳定性实验考察结果 30-31 4.1.3 重复性实验考察结果 31-32 4.2 指纹图谱的建立及色谱峰的鉴定 32-33 4.3 共有指纹峰的标定及均值相似度的计算 33-35 5 讨论 35-37 6 本研究存在的问题及如何处理 37-38 参考文献 38-39 第二部分 玉屏风散血清指纹图谱及部分成分药动学研究 39-61 1 引言 39-40 2 实验材料 40-41 2.1 药品和试剂 40 2.2 仪器 40-41 2.3 生物样品来源 41 3 实验方法 41-43 3.1 灌胃溶液的制备 41 3.2 动物给药方案和取血 41-42 3.2.1 指纹图谱给药方案和取血 41 3.2.2 药动学给药方案和取血 41-42 3.3 血清供试品的制备 42 3.4 色谱条件 42 3.4.1 指纹图谱色谱条件 42 3.4.2 药动学色谱条件 42 3.5 血清指纹图谱的研究 42-43 3.6 药动学研究 43 3.6.1 标准曲线的绘制 43 3.6.2 分析方法的回收率考察 43 3.6.3 精密度考察 43 3.6.4 药动学观察 43 4 实验结果 43-55 4.1 指纹图谱研究结果 43-46 4.2 药动学研究结果 46-55 4.2.1 基于药动学色谱条件下的色谱图 46-48 4.2.2 升麻苷的HPLC 色谱图 48-49 4.2.3 升麻苷标准曲线的绘制、回收率与精密度的测定 49-51 4.2.3.1 标准曲线的绘制 49-50 4.2.3.2 回收率的测定 50-51 4.2.4 升麻苷的药动学考察结果 51-53 4.2.5 未知峰①的药动学考察结果 53-55 5 实验结果分析 55 6 讨论 55-58 7 本研究的不足及今后工作进展 58-59 参考文献 59-61 附录 61-63 致谢 63-65 综述:中药HPLC 指纹图谱的研究进展 65-82
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药材
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