学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

淡水涡虫眼点再生及Djnos基因对眼点再生相关性研究

作　者: 王清华
导　师: 陈广文
学　校: 河南师范大学
专　业: 动物学
关键词: 涡虫眼点再生荧光定量PCR Djnos
分类号: X174
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文以日本三角涡虫(Dugesia japonica)和阳城多目涡虫(Polycelis yangchengensis)为材料,探索了这两种涡虫眼点再生的最适温度。结果显示:日本三角涡虫眼点再生的最适温度为22℃,阳城多目涡虫眼点再生的最适温度是14℃。在此基础上,对22℃去头避光培养的日本三角涡虫0-11天和14℃去头避光培养的阳城多目涡虫再生0天,7天,13天,14天,15天,17天,18天,19天,20天,23天,26天,29天,33天,35天,38天的再生个体,通过石蜡切片技术,观察这两种涡虫眼点的再生过程。结果显示:日本三角涡虫比阳城多目涡虫眼点再生速度快很多。日本三角涡虫再生第1天再生组织非常明显,再生第3天看到色素团,再生第4天明显看到眼点,以后各天眼点逐渐完善。阳城多目涡虫再生第7天再生组织非常明显,再生第14或15天看到很小的眼点,再生第18天看到眼点数目明显增多,再生完全至少需要38天。除了时间上的不同,两种涡虫再生组织的紧密度也不同,日本三角涡虫的新生组织比较致密,与原有组织明显不同而多目涡虫新生组织与原有组织紧密度区别不大。为了选择稳定的内参基因,本文通过Real-time PCR技术对涡虫再生研究中常用的三个内参基因—18SrRNA、ACTB和DjEF2在涡虫头部再生过程中的表达水平和稳定性进行了研究,结果表明:ACTB的原始Ct值变异系数最小(CV=8.9%);将所得数据分别用GeNorm和NormFinder软件时行分析,结果表明:ACTB的M值为0.975(GeNorm)和稳定值为0.021(NormFinder)。因此,在涡虫头部再生研究中,ACTB为首选内参基因。使用实时荧光定量PCR技术探索了日本三角涡虫再生过程中不同时间点Djnos的表达,结果显示,在日本三角涡虫头部再生的第3天,Djnos表达比较高,而再生的0-3天是眼点分化的关键时期,说明Djnos和日本三角涡虫眼点前期的形成有关。在再生第12天,表达也比较高,可能与生殖干细胞的形成和保持有关;Djnos在日本三角涡虫的有性个体和无性个体中均表达,而且在无性个体的表达量高于有性个体。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
缩略词  7-10
1 前言  10-26
  1.1 淡水涡虫的分类地位  10-11
  1.2 涡虫再生研究进展  11-20
    1.2.1 涡虫神经再生研究进展  13-17
    1.2.2 涡虫眼点再生研究进展  17-20
  1.3 实时荧光定量RT-PCR 内参基因的选择  20-22
  1.4 Djnos 基因研究进展  22-23
  1.5 本课题立题依据、目的及意义  23-26
2 材料与方法  26-38
  2.1 材料  26-29
    2.1.1 材料来源  26
    2.1.2 主要仪器和试剂  26-27
    2.1.3 试剂的配制  27-28
    2.1.4 引物序列  28-29
  2.2 方法  29-38
    2.2.1 淡水涡虫眼点再生的最适温度优化  29-30
    2.2.2 淡水涡虫再生眼点的形态发生  30-31
    2.2.3 日本三角涡虫眼点再生过程Real-time PCR 最佳内参基因的选择  31-32
    2.2.4 Djnos 基因的动态表达  32-38
3 结果  38-54
  3.1 日本三角涡虫和阳城多目涡虫眼点再生最适温度优化  38-44
    3.1.1 日本三角涡虫眼点再生最适温度  38-40
    3.1.2 多目涡虫眼点再生最适温度  40-44
  3.2 眼点再生的组织学结果  44-47
    3.2.1 日本三角涡虫眼点再生过程的组织学结果  44-45
    3.2.2 阳城多目涡虫眼点再生过程的组织学结果  45-47
  3.3 日本三角涡虫眼点再生过程Real-time PCR 最佳内参基因的选择  47-49
  3.4 Djnos 基因的动态表达  49-54
    3.4.1 Djnos 基因在日本三角涡虫眼点再生过程中的表达  49-52
    3.4.2 Djnos 基因在日本三角涡虫有性与无性个体眼点再生过程中的表达  52-54
4 讨论与分析  54-60
  4.1 日本三角涡虫和阳城多目涡虫眼点的再生形态学及组织学分析  54-55
  4.2 淡水涡虫石蜡切片制备过程中的难点及解决方法  55-56
  4.3 Real-time PCR 相关参数的分析  56-58
  4.4 日本三角涡虫眼点再生过程Real-time PCR 最佳内参基因的选择  58
  4.5 Djnos 实时荧光定量表达的分析  58-60
5 结论  60-62
参考文献  62-72
致谢  72-74
攻读硕士学位期间发表的论文和参与的课题  74-75

淡水涡虫眼点再生及Djnos基因对眼点再生相关性研究

内容摘要

全文目录

相似论文