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ERK活性对哮喘大鼠CyclinD1表达的影响及调控作用

作　者: 张爱芝
导　师: 张焕萍
学　校: 山西医科大学
专　业: 呼吸内科学
关键词: 细胞周期蛋白D1 细胞外信号调节蛋白激酶 气道重塑 哮喘
分类号: R562.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 69次
引　用: 2次
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内容摘要


目的：探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)对哮喘大鼠气道CyclinD1表达的影响，ERK在调控大鼠气道平滑肌细胞增殖中CyclinD1的作用。方法：本研究分两部分第一部分：原代培养大鼠的平滑肌细胞(ASMCs),给予ERK激动剂表皮生长因子EGF和抑制剂PD98059干预ASMCs生长，依处理方式不同分为5组：(1)正常对照组；(2)哮喘对照组；(3)E组：EGF20ng/mL; (4) P+E组：PD98059 10μmol/L 1个小时后添加EGF20ng/ml; (5)PD组：PD98059 10μmol/L。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖能力，流式细胞术(FCM)测定细胞周期和CyclinD1的蛋白含量，RT-PCR方法检测CyclinD1 mRNA表达水平。第二部分：原代培养气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs),采用正常和哮喘大鼠的第3-6代细胞，分别给予ERK激动剂表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)和抑制剂PD98059干预ASMCs生长，根据处理方式不同分别分为4组：(1)空白组；(2)E组，EGF20ng/mL;(3)P+E组，PD98059 10μmol/L+EGF 20ng/ml; (4)PD组，PD98059 10μmol/L。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖能力，流式细胞术(FCM)测定细胞周期，RT-PCR方法检测ERK1/2和CyclinD1 mRNA表达水平，线性相关分析评价ERK和CyclinD1表达的关系。结果：第一部分：(1)在E组、PD组与哮喘(正常)对照组比较，其S+G2/M期比例和吸光度A值差异有统计学意义(P<0.05)；P+E组与对哮喘对照组比较差异无统计学意义。(2)E组、PD组的CyclinD1蛋白和CyclinD1 mRNA的表达水平与哮喘(正常)对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；而P+E组与哮喘空白组比较无明显差异(P>0．05)；在本实验中CyclinD1蛋白和CyclinD1 mRNA的表达趋势一致。第二部分：(1)在哮喘组内，E组、PD组与哮喘空白组比较，其S+G2/M期比例和吸光度A值差异有统计学意义(P<0.05)；在正常组组内，E组、PD组与正常空白组比较，其S+G2/M期比例和吸光度A值差异有统计学意义(P<0.05)；哮喘组的S+G2/M期比例和吸光度A值比正常组要高。(2)在哮喘组内，E组、PD组的ERK1/2 mRNA和CyclinD1 mRNA的表达水平与哮喘空白组比较，差异有统计学意义P<0.05)；正常组组内与哮喘组组内变化趋势一致，哮喘组的ERK1/2 mRNA和CyclinD1 mRNA的表达比正常组高。(3)在mRNA水平，对大鼠ASMCs ERK1/2和CyclinD1的表达采用相关分析，结果显示ERK1/2和CyclinD1的表达呈明显正相关(r=0.565，P<0.01)。结论：(1)ERK活性促进哮喘大鼠ASMCs的增殖，同时使CyclinD1在哮喘平滑肌细胞中的表达增加，提示ERK活性的改变直接影响了CyclinD1在大鼠气道的表达，进而影响气道重塑的形成，为阐明哮喘的发病机制提供实验依据。(2)ERK能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖，CyclinD1参与了正常和哮喘大鼠ASMCs的增殖，ERK1/2和CyclinD1的相关性分析提示ERK信号通路可能通过调节CyclinD1表达进而影响大鼠ASMCs的增殖。

全文目录


英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
引言  10-12
论文主体  12-31
  第一部分 ERK水活性对哮喘大鼠CyclinD1表达的影响  12-21
    前言  12
    材料和方法  12-16
    结果  16-18
    讨论  18-19
    参考文献  19-21
  第二部分 ERK在调控大鼠气道平滑肌细胞增殖中CyclinD1的作用  21-31
    前言  21
    材料和方法  21-26
    结果  26-27
    讨论  27-29
    参考文献  29-31
研究总结  31-32
附图  32-39
综述  39-43
个人简介  43-44
致谢  44

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 呼吸系及胸部疾病 > 气管和支气管疾病 > 支气管疾病 > 支气管哮喘
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