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新一代重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSFa）的大鼠药代动力学研究

作　者: 刘潇潇
导　师: 蒋永平；戴卫；丁欣欣
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生物医学工程
关键词: 新一代重组人粒细胞集落刺激因子药代动力学半衰期生物利用度蛋白水解速率
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：测定新一代重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)在大鼠体内的药代动力学特性及体外的水解速率,从而探索对其蛋白序列的改造是否达到预期效果。方法：在大鼠体内药代动力学研究中,对大鼠进行皮下或尾静脉注射rhG-CSFa或同类进口药,共分三个剂量组：20,50或100μg／kg,随后在0.08-12小时内的12个时间点采集血样。采用双抗体夹心酶联免疫测定法测定不同时间点血样中药物的浓度,最后用winnonlin 5.2软件将药代数据代入一室或二室模型,计算药代参数。体外水解试验中,将rhG-CSFa加入血清或全血后,在0-30分钟内,每3分钟取样一次,之后亦采用双抗体夹心酶联免疫测定不同时间的样品中的浓度随时间的变化,从而得到水解速率曲线。结果：大鼠体内药代动力学实验显示,两种给药方式的每个剂量组中,rhG-CSFa的药时曲线下面积(AUC),半衰期(T1／2)及最大血药浓度(Cmax)均大于作为对照的同类进口产品。体外水解实验表明,对照药在全血及血清中的水解速率分别为rhG-CSFa的1.8倍及1.5倍。结论：这些研究表明rhG-CSFa比同类进口产品的稳定性好、生物利用度高,抗蛋白酶水解能力强且与其受体结合能力强,符合最初设计设想,有望发展成为治疗白细胞减少症及中性粒细胞缺乏症的新一代重组类药物。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
前言  7-11
实验材料及方法  11-18
  一、rhG-CSFa单克隆抗体的制备  11-15
    1、实验材料  11-12
      1.1 主要器材  11
      1.2 主要试剂  11-12
      1.3 实验动物  12
      1.4 细胞株  12
    2、实验方法  12-15
      2.1 小鼠的免疫  12-13
      2.2 杂交瘤的制备  13
      2.3 目的细胞株的筛选鉴定及单克隆细胞株的制备保存  13-15
        2.3.1 ELISA法筛选目的细胞株  13-14
        2.3.2 利用有限稀释法进行的杂交瘤细胞单克隆化  14
        2.3.3 western blot鉴定  14-15
        2.3.4 小鼠腹水的制备及单克隆抗体的粗提  15
  二、rhG-CSFa的药代动力学实验  15-17
    1、实验材料  15
      1.1 主要器材  15
      1.2 主要试剂  15
      1.3 实验动物  15
    2、实验方法  15-17
      2.1 兔抗rhG-CSFa抗体的制备  16
      2.2 ELISA法测定rhG-CSFa的浓度  16
      2.3 ELISA法测定rhG-CSFa及同类进口药浓度的标准曲线的绘制  16
      2.4 ELISA法测定rhG-CSFa浓度的检测限  16
      2.5 回收率及精密度实验  16-17
      2.6 大鼠血清样品的采集  17
      2.7 药代动力学参数计算  17
      2.8 统计分析  17
  三、rhG-CSFa的体外水解实验  17-18
    1、实验材料  17
      1.1 主要试剂  17
    2、实验方法  17-18
结果与分析  18-25
  1、单克隆抗体细胞株上清的Western blot鉴定结果  18-19
  2、腹水中anti-rhG-CSFa效价测定结果  19-20
  3、ELISA测定rhG-CSFa浓度的标准曲线及其检测限  20
  4、回收率及精密度  20-21
  5、rhG-CSFa在大鼠中的药代动力学特性  21-23
  6、rhG-CSFa在体外全血和血清中的水解速率  23-25
讨论  25-27
小结  27-28
参考文献  28-31
论文综述  31-42
附录  42-53
致谢  53-54
研究生简历  54-55

新一代重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSFa）的大鼠药代动力学研究

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