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食品与水中诺如病毒检测方法的建立及其在疫情暴发中的初步应用

作　者: 周晓红
导　师: 杨杏芬
学　校: 暨南大学
专　业: 流行病与卫生统计学
关键词: 诺如病毒水食品检测方法病毒富集疫情
分类号: R123.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 164次
引　用: 3次
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内容摘要

目的建立水及几种诺如病毒污染的高风险食品(贝类、蔬菜、软质水果)的病毒富集检测方法,并对所建方法进行评价：同时将所建立的方法初步应用于诺如病毒胃肠炎疫情中,对疫情暴发原因进行溯源,为诺如病毒胃肠炎防控提供实验室证据。方法建立水及高风险食品中诺如病毒富集检测方法包括三部分内容：通过优化反应体系及反应条件从而建立荧光定量PCR检测诺如病毒的方法；建立及评估MCE-PEG富集法(混合硝酸纤维素膜第一次富集和聚乙二醇沉淀第二次富集)对水中诺如病毒的富集效果及灵敏度；对食品中诺如病毒富集检测的各条件进行优化后,建立贝类、蔬菜、软质水果等食品的病毒富集检测方法。诺如病毒疫情暴发时,应用所建立的方法采集可疑的食品及水进行检测,结合流行病学调查结果确定疫情暴发原因。结果1.所建立的荧光定量PCR方法能有效检测诺如病毒。该方法对108～101copy／μl范围内的病毒具有良好的线性关系,最低检出限为101copy／μl。与容易引起腹泻症状的轮状病毒、腺病毒、星状病毒、肠道病毒均无交叉反应；诺如病毒GⅠ、GⅡ两种常见感染人类的亚型之间无交叉反应；批内及批间重复性较好。2. MCE-PEG富集法能有效的富集检测水中诺如病毒。经过混合硝酸纤维素膜第一次富集后,待滤水被浓缩100倍,病毒平均回收率为56.12%,灵敏度是待滤水中病毒浓度为10copy/μl。PEG (Polyethylene Glycol,聚乙二醇)沉淀第二次富集后,待浓水浓缩1000倍,病毒平均回收率为42.47%,灵敏度为待滤水中病毒浓度1copy／μl。3.通过优化检测条件,建立了食品中诺如病毒检测方法：甘氨酸(0.05mol/L)-Nacl(0.15 mol/L,ph9.5)洗脱、漩涡震荡5min、PEG沉淀后加入氯仿丁醇、QIAGEN硅胶膜法提取RNA。基于优化好的条件建立几种高风险食品中诺如病毒富集检测方法,结果显示：蔬菜平均病毒回收率为24.86%,灵敏度为待检样本中病毒浓度5.93×104copy/g;贝类平均病毒回收率为2.08%,灵敏度为待检样本中病毒浓度6.11×105copy/g;草莓中平均病毒回收率为5.42%,灵敏度为待检样本中病毒浓度4.91×106copy／g。4.共两起疫情应用水中诺如病毒富集检测方法。其一,通过应用水中病毒富集检测方法,在疫情暴发地的小河涌水中检测出与病例肛拭核苷酸序列一致的病毒株,证实小河涌水已经受到粪便的污染,指导了疫情后期的环境消毒工作。其二,通过应用水中病毒富集检测方法,暴发疫情的学校中独立供水的水井检测出与病例序列一致的病毒,结合流行病学调查,证实是一起水源性诺如病毒胃肠炎疫情暴发。结论首次在我国建立一套具可操作性的水及食品中诺如病毒富集检测方法。通过在疫情中的初步应用,验证了该套方法具有一定的实用价值。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-17
  1 研究背景  9-13
  2 国内外研究现状  13-15
  3 研究意义及内容  15-17
第一部分食品与水中诺如病毒富集检测方法的建立及评价  17-42
  1 材料与方法  17-25
  2 实验结果  25-38
  3 讨论  38-42
第二部分食品与水中诺如病毒富集检测方法在疫情中的初步应用  42-60
  1 应用案例  42-59
  2 讨论  59-60
结论  60-61
进一步研究设想  61-62
参考文献  62-67
附录  67-79
  1 缩略词表  67-68
  2 食品及水中诺如病毒检测方法操作规程  68-78
  3 攻读学位期间科研工作情况  78-79
致谢  79

食品与水中诺如病毒检测方法的建立及其在疫情暴发中的初步应用

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