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免疫分析方法研究与不透明样品池的修饰

作　者: 狄燕清
导　师: 杨秀云
学　校: 长春理工大学
专　业: 物理化学
关键词: 固相时间分辨荧光光谱分析铕螯合剂样品池三聚氰胺甲醛树脂4，4’-二溴-6，6’-二(N，N-二(乙氧基羰基)氨甲基)-2，2’-联吡啶
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

高的灵敏度和好的选择性,一直是分析工作者追求的目标。时间分辨荧光免疫分析作为一种超高灵敏度的分析方法,受到了国内外众多科学家的重视。该方法具有许多独特优点,已经广泛应用于临床检测、医学、生命科学等各个领域。本论文主要以提高时间分辨荧光免疫分析灵敏度为目的,在自行研制的时间分辨荧光免疫分析仪和合成新荧光化合物的基础上,首先对新合成的4,4′-二溴-6,6′-二（N,N-二（乙氧基羰基）氨甲基）-2,2′-联吡啶-Eu（Ⅲ）螯合物的荧光性质及时间分辨荧光光谱分析方法进行研究;其次对Eu-TTA-phen、Eu-β-NTA-TOPO等化合物进行了时间分辨荧光光谱分析检测。研制不透明样品池并将其应用到固相时间分辨荧光免疫分析中,提高反应灵敏度。将自行合成的三聚氰胺甲醛树脂涂覆于聚苯乙烯内表面,对其进行化学修饰,引入活性基团-NH₂,与抗原、抗体共价连接,实现以化学共价结合法代替物理吸附法,来提高抗原或抗体的结合量,使免疫复合物结合量增大,进而增强检测灵敏度。固相不透明免疫样品池的研究对蛋白质连接技术的发展具有重要意义。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
目录  6-8
第一章绪论  8-20
  1.1 免疫分析方法研究进展  8-9
  1.2 荧光免疫分析法(FIA)  9-11
    1.2.1 荧光的产生  10
    1.2.2 荧光免疫分析的原理  10-11
  1.3 时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)  11-14
    1.3.1 时间分辨荧光测定原理  11
    1.3.2 金属螯合物标记物的发光机理及荧光性质研究  11-12
    1.3.3 时间分辨荧光免疫分析体系  12-14
  1.4 实验结果分析和理论依据  14-16
    1.4.1 线性相关系数的计算及含义  14-15
    1.4.2 方法检出限  15
    1.4.3 相对标准偏差  15-16
  1.5 免疫反应样品池的修饰  16-19
    1.5.1 固相材料表面功能化的两种方法  16-18
    1.5.2 三聚氰胺甲醛树脂的应用研究  18-19
  1.6 论文研究的目的和意义  19-20
第二章稀土荧光螯合物时间分辨荧光光谱分析方法研究  20-38
  2.1 试剂及仪器  20-21
    2.1.1 试剂和材料  20-21
    2.1.2 主要仪器  21
  2.2 实验方法  21-22
    2.2.1 4，4’-二溴-6，6’-二(N，N-二(乙氧基羰基)氨甲基)-2，2’-联吡啶的合成  21
    2.2.2 水解及水解液的配制  21
    2.2.3 铕储备液的配制  21-22
    2.2.4 4，4’-二溴-6，6’-二(N，N-二(乙氧基碳基)氨甲基)-2，2’-联吡啶荧光溶液配制  22
    2.2.5 解离增强液的制备  22
    2.2.6 荧光检测  22
  2.3 结果和讨论  22-26
    2.3.1 自行研制固相TRFIA仪器理论分析及原理图  22-23
    2.3.2 稀土螯合物荧光性质研究  23
    2.3.3 螯合物中间体4，4’-二溴-6，6’-二(N，N-二(乙氧基羰基)氨甲基)-2，2’-联吡啶水解条件研究  23-25
    2.3.4 三氟乙酸加入量的影响  25
    2.3.5 水解时间的影响  25-26
    2.3.6 水解液的加入量对荧光强度的影响  26
  2.4 荧光性质研究  26-33
    2.4.1 荧光光谱  26-27
    2.4.2 荧光寿命  27-28
    2.4.3 分析检测  28
    2.4.4 Eu-β-二酮体体系的分析方法研究  28-29
    2.4.5 铕螯合物Eu-β-NTA-TOPO方法的线性范围和精密度  29-31
    2.4.6 铕螯合物TTA、phen方法的线性范围和精密度  31-33
  2.5 荧光粉末分析  33-36
    2.5.1 铽粉末水浸时间的影响  34-35
    2.5.2 结果讨论  35
    2.5.3 荧光光谱  35-36
    2.5.4 荧光寿命  36
  2.6 小结  36-38
第三章不透明样品池的修饰  38-49
  3.1 试剂及仪器  38-39
    3.1.1 试剂和材料  38-39
    3.1.2 主要仪器  39
  3.2 实验方法  39-40
    3.2.1 包被液的制备  39
    3.2.2 聚苯乙烯微孔板的修饰和免疫结合量测定  39-40
  3.3 三聚氰胺甲醛树脂(MF)的制备  40-43
    3.3.1 三聚氰胺甲醛树脂合成反应机理研究  40-41
    3.3.2 三聚氰胺甲醛树脂合成的基本反应  41-42
    3.3.3 三聚氰胺甲醛树脂缩聚反应的研究  42
    3.3.4 合成MF实验方法  42-43
  3.4 结果讨论  43-46
    3.4.1 反应温度、反应时间的影响  43-44
    3.4.2 溶液pH值对合成MF树脂的影响  44-45
    3.4.3 稳定剂的影响  45-46
  3.5 三聚氰胺甲醛树脂红外及残留物分析  46-48
    3.5.1 三聚氰胺甲醛树脂中游离甲醛的测定  46
    3.5.2 三聚氰胺甲醛树脂中氨基的测定  46-47
    3.5.3 三聚氰胺甲醛树脂红外分析  47
    3.5.4 样品池的结构  47-48
  3.6 免疫结合量的测定分析  48
  3.7 小结  48-49
第四章结论与展望  49-50
  4.1 结论  49
  4.2 展望  49-50
致谢  50-51
参考文献  51-53

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