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高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活氯通道的电生理研究

作　者: 曾闵
导　师: 庞玉生
学　校: 广西医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 左向右分流肺动脉高压钙激活性氯离子通道肺动脉平滑肌细胞膜电流膜片钳
分类号: R543
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的通过对大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术,建立高肺血流致肺动脉高压模型,模拟先天性心脏病左向右分流的高肺血流量的病理状态,观测肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)钙激活氯离子通道(ClCa)的电生理特性,并探讨其在高肺血流性肺动脉高压形成过程中的可能作用。方法SD大鼠(雌雄不分)40只,6-7周龄,180-220g,随机分为3组:(1)对照组(A组,n=10):正常大鼠;(2)假手术组(B组,n=10):仅行开腹手术,暴露腹主动脉及下腔静脉,不作分流手术;(3)模型组(C组,n=20):行腹主动脉-下腔静脉分流术,建立左向右分流致肺动脉高压模型。术后大鼠同条件下饲养11周后,用右心导管法测定大鼠右心室压力(RVSP),并检测右心室肥厚指数(RVHI);分离肺内2-3级肺动脉分支,急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶)分离出单个肺动脉平滑肌细胞(PASMC),应用膜片钳全细胞记录模式,测定各组大鼠PASMCs静息膜电位、钙激活氯离子通道电流及电流密度的改变,比较各组大鼠I-V曲线的变化,并进行相关性分析。结果(1)模型组(C组)大鼠的RVSP和RVHI均明显高于正常对照组(A组)、假手术组(B组),(均P<0.01);B组大鼠的RVSP和RVHI与A组比较,差异没有显著性(均P>0.05)。(2)C组大鼠PASMCs的膜静息电位高于A、B两组,差异具有显著性(均P<0.05);B组大鼠PASMCs的膜电位与A组比较,差异无显著性(均P<0.05)。(3)A、B、C三组大鼠PASMCs的外向ClCa电流Itd(在+80mV电压刺激时的峰值)、电流密度分别为:A组381.609±39.898pA、37.864±59.06pA/pF;B组360.475±31.053pA、35.177±3.768 pA/pF;C组364.487±38.96pA、364.487±38.96pA/pF,三组间的差异无统计学意义。(4)ClCa的内向电流Ita(il在+20mV电压刺激时的峰值)、电流密度分别为: C组-605.912±105.82pA、-58.94±11.14pA/pF ;B组:-443.71±28.88 pA、-41.363±1.75 pA/pF; A组:-480.85±34.82 pA、-47.59±5.16 pA/pF。C组Itai、电流密度的绝对值较之A、B组增大,差异有显著性(均P<0.05);B组与A组之间差异无统计学意义。(5)A、B、C三组大鼠PASMCs上ClCa外向电流Itd的I-V曲线无明显漂移。(6)模型组(C组)大鼠钙激活性氯离子通道内向电流Itail的I-V曲线明显向下移;假手术组(B组)大鼠的I-V曲线和正常对照组(A组)大鼠的I-V曲线漂移无统计学意义。(7)静息膜电位(Em)与RVSP、RVHI呈显著正相关;Itail及Itail的电流密度与RVSP、RVHI、静息膜电位(Em)均呈显著负相关关系(P<0.01);而Itd及Itd的电流密度与RVSP、RVHI、静息膜电位(Em)均无明显相关。结论(1)腹主动脉-下腔静脉分流所致高肺血流性肺动脉高压大鼠,随着肺动脉压的增高,肺动脉平滑肌细胞的静息膜电位升高。(2)本实验首次发现,高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞膜上钙激活性氯离子通道内向电流(Itail)的绝对值增大,I-V曲线下移。(3)提示钙激活性氯离子通道电流的改变可能可在高肺血流性肺动脉高压的形成过程中起一定作用。

全文目录

缩略语一览表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-13
一、实验材料  13-16
  1 研究对象  13
  2 实验耗材和主要实验仪器  13-14
  3 实验试剂和溶液  14-16
二、实验方法  16-28
  1 实验分组设计  16
  2 高肺血流性大鼠肺动脉高压模型的建立  16-20
  3 大鼠右心室压力的检测  20-22
  4 右心室肥厚指数(RVHI)的测定  22
  5 大鼠肺动脉平滑肌细胞的急性分离  22-23
  6 膜片钳记录  23-27
  7 数据分析和统计学处理  27-28
三、实验结果  28-41
  1 大鼠一般情况  28
  2 各组大鼠肺动脉平均压(RVSP)、右心室肥厚指数(RVHI)的比较  28-30
  3 肺动脉平滑肌细胞的形态学观察  30-32
  4 各组大鼠 PASMCs 的膜静息电位、ClCa 膜电流  32-37
  5 三组大鼠钙激活性氯离子通道 I-V 曲线的比较  37-39
  6 各项指标的相关性分析  39-41
四、讨论  41-49
五、结论  49-50
参考文献  50-54
综述  54-65
致谢  65-66
攻读硕士学位期间发表的学术论文  66

高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活氯通道的电生理研究

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