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目的:应用黄芩茎叶总黄酮（SSTF）干预实验大鼠,用Zea Longa改良线栓法制备大脑中动脉栓塞模型。记录大鼠神经功能缺损评分,计算皮质梗塞体积,定量分析脑皮质微血管构筑,观察脑缺血再灌注皮质生化、病理学和神经元凋亡相关基因的变化,探讨黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注损伤皮质的保护作用。方法:健康清洁级SD大鼠200只,雌雄各半,随机分为5组,假手术组（sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、SSTF干预组（根据给予不同剂量又分为SSTFⅠ、Ⅱ、Ⅲ组）,每组40只。SSTF组于术前一周分别给予SSTF50mg·kg-1·d-1、100 mg·kg-1·d-1、200 mg·kg-1·d-1。SSTF干预组和I/R组制备局灶性脑缺血再灌注模型。根据Zea Longa法对大鼠神经功能评分,TTC染色计算大鼠脑皮质梗塞体积,单宁酸-氯化铁法显示大脑皮质微血管,测出右侧皮质组织匀浆中的丙二醛（MDA）的含量、超氧化物歧化酶（SOD）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性。SABC免疫组化法和HE染色法观察皮质内细胞凋亡及组织病理学改变,观测皮质神经元和血脑屏障的超微结构。所有数据采用SPSS11.5单因素方差分析处理,两两之间比较用LSD-t检验,P＜0.05为有统计学意义。结果:1神经功能缺损评分假手术组未见异常,缺血再灌注组和SSTF干预组均出现神经功能缺损症状,缺血再灌注组尤为显著。可观察到:右侧Homer症,提尾悬空时左前爪屈曲、内收、不能伸直,行走时身体以左后腿为圆心转圈,严重时向左侧倾倒。SSTFⅡ、Ⅲ组与缺血再灌注组比较有显著性差异（P＜0.05）;而SSTF干预组三个剂量之间比较无明显差异（P＞0.05）。各组评分分别为:假手术组0±0,缺血再灌注组2.80±0.83,SSTFⅠ、Ⅱ、Ⅲ组分别为2.00±0.71,1.40±0.54,1.20±1.38。2脑皮质梗塞体积百分比测定假手术组脑片染成均匀红色,缺血再灌注组和SSTF干预各组大鼠额顶叶皮层、部分颞叶皮层、纹状体外侧及海马等处出现无染色的梗塞区,与缺血再灌注组皮质梗塞体积百分比（8.54±0.76）%相比,黄芩茎叶总黄酮干预各组梗塞体积明显减小,分别为:（6.82±0.60）%,（5.10±0.74）%,（4.20±1.34）%,有显著性差异（P＜0.01）;SSTFⅡ、Ⅲ组与Ⅰ组比较,有统计学差异（P＜0.01）,但SSTFⅡ、Ⅲ组之间无明显差异（P＞0.05）。3脑皮质微血管构筑的定量分析Mivnt图像分析系统分析微血管密度（microvesser density,MVD）和微血管面积密度（microvesser area density,MVA）。于额叶皮质随机选取3个视野,分别计算MVD值和MVA值,取平均值作为该只大鼠额叶皮质的MVD值和MVA值。与缺血再灌注组相比,SSTF干预各组MVD和MVA均明显上升（P＜0.05）,SSTFⅡ、Ⅲ组与Ⅰ组之间有统计学差异（P＜0.01）,但SSTFⅡ、Ⅲ组之间无明显差异（P＞0.05）。4脑皮质组织生化指标的变化大鼠缺血2h再灌注24h时,脑皮质组织MDA含量显著增加,SOD和LDH酶活性明显降低。与缺血再灌注组相比,SSTF干预各组脑皮质组织SOD和LDH酶活性提高,MDA含量减少,有显著性差异（P＜0.05～0.01）。5脑皮质组织的光镜和电镜病理学变化光镜下可见假手术组细胞形态正常,边界清楚,核大而圆,核仁清晰。缺血再灌注组梗死灶内脑组织软化,细胞碎裂、胞浆液化,胞浆淡染,核固缩呈三角形或偏位。SSTFⅡ、Ⅲ组细胞损伤减轻,形态结构趋于正常,但仍可见少量神经细胞形态异常。电镜下观察假手术组细胞膜完整,边界清楚,核仁居中,核内染色质分布均匀,细胞内线粒体丰富,高尔基体、内质网等细胞器完好;内皮细胞形态正常,基膜完整。缺血再灌注组可见广泛的脑水肿,神经细胞固缩坏死,毛细血管褶皱甚至闭合,内皮细胞形态及细胞膜不规则,基底膜不完整。线粒体肿胀、数目减少,部分核膜融合消失。高尔基体和内质网扩张甚至消失。SSTF干预各组较缺血再灌注组均有所改善,毛细血管周围水肿减轻,多数细胞形态结构正常,基膜基本完整,部分神经细胞可见细胞核轻度不规则,异染色质边集现象。线粒体肿胀减轻、数目增多;内质网和高尔基体趋于正常。其中:SSTFⅡ、Ⅲ组比Ⅰ组效果明显。6 Fas、FasL、Hsp70蛋白表达Fas和Hsp70主要表达于胞浆和胞膜,FasL主要表达于胞膜。光镜下观察、进行图像分析,统计出皮质缺血损伤区5个高倍镜视野Fas、FasL、Hsp70表达的阳性面积率。与缺血再灌注组比较,SSTF干预各组Fas、FasL阳性表达面积率明显降低（分别为:缺血再灌注组,0.047029±0.009163和0.050615±0.010453;SSTFⅠ组,0.038184±0.008293和0.038697±0.009886,P＜0.05;SSTFⅡ组,0.021024±0.004646和0.026830±0.006299,P＜0.01;SSTFⅢ组,0.019851±0.002611和0.022099±0.00668,P＜0.01）;SSTF干预各组Hsp70阳性面积率明显增加（缺血再灌注组,0.037565±0.003882;SSTFⅠ组,0.052303±0.012600,P＜0.05;SSTFⅡ组,0.068629±0.012943,P＜0.01;SSTFⅢ组,0.072681±0.016248,P＜0.01）。以上数据均以（?）±s表示,SPSS11.5统计软件One-Way ANOVA法处理。结论:1 Zea Longa改良线栓法制备的大鼠MCAO I/R模型能准确控制缺血及再灌注时间,较好地模拟人类缺血性脑血管病大脑中动脉局灶缺血溶栓后再灌注的病理生理状态,便于评价再灌注作用及治疗时间窗的选择。是研究脑缺血再灌注损伤的较为理想的动物模型。2 SSTF干预各组对缺血再灌注损伤脑皮质组织均有预防性的保护作用,体现在神经功能、梗死体积、微血管构筑、生化和病理学等方面。而SSTFⅡ、Ⅲ组较Ⅰ组效果更好,SSTFⅡ、Ⅲ组之间无显著性差异,为节省中药资源,我们认为应用SSTFⅡ即可达到预防性保护作用。
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