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重配制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株

作　者: 张英伟
导　师: 廖国阳；姜述德；李卫东；孙明波；李映波
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 流感病毒遗传重配 H1N1 Vero细胞
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

流行性感冒是由流感病毒(influenza virus)感染引起的一种呼吸道疾病,能感染人和多种动物,其特点是短期突然爆发,迅速流行,并具有广泛的破坏性。目前防治流感的最有效方法是接种流感疫苗。市面上所用的流感疫苗是以鸡胚为基质生产的灭活疫苗。使用鸡胚生产流感疫苗存在许多需要改进的方面,比如不利于应对大规模流感爆发等问题。限于鸡胚生产流感疫苗的局限性,开发细胞流感疫苗称为当务之急。Vero细胞是WHO积极推荐用于流感疫苗生产的细胞基质,能够利用生物反应器进行大规模培养,在流感疫苗生产上有着广阔的应用前景。但Vero细胞不是流感病毒的天然易感细胞,因此获得流感病毒Vero细胞高产适应株对于流感疫苗的生产具有重要意义。本实验利用传统的流感病毒重配方法,制备Vero细胞适应性高产的H1N1流感病毒株,试图解决以Vero细胞为基质制备流感疫苗病毒产量低等瓶颈问题。以流感病毒Vero细胞适应株A/yunnan/1/2005Va(H3N2)为母本株与WHO推荐的2007-2008年度北半球流感疫苗生产用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1)共同感染SPF鸡胚和Vero细胞,重配病毒用抗A/yunnan/1/2005Va(H3N2)抗体筛选,在Vero细胞连续传代12代,血凝抑制试验、免疫荧光、琼脂扩散试验表明重配病毒为H1N1;RT-PCR扩增后基因序列分析证明含有A/Caledonia/20/99(H1N1)的HA和NA。将重配病毒在Vero细胞上大量培养,经甲醛灭活,制备灭活疫苗,免疫动物观察其免疫原性。结果表明:获得了一株Vero细胞适应性的高产的H1N1流感病毒株,免疫原性与重配前的毒株没有显著性差异。通过流感病毒Vero细胞适应株与流行株的重配和抗体筛选,可以获得流行株流感病毒Vero细胞适应株。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
前言  7-10
一、实验材料  10-11
二、实验方法  11-17
三、结果和分析  17-29
四、讨论  29-30
五、小结  30-31
参考文献:  31-32
论文综述  32-42
附录  42-51
致谢  51-52
个人简历  52-53

重配制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株

内容摘要

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