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甘肃省昆虫病原线虫分子生物学鉴定

作　者: 邢玉芳
导　师: 刘长仲
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 昆虫病原线虫分子生物学 DNA序列 PCR扩增系统发育树抗干燥能力
分类号: S476.15
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

昆虫病原线虫是一类宝贵的天敌资源,对农、林及卫生害虫的综合治理、环境保护以及实现农田生物多样性,都具有重要的学术和实用价值。目前,国内、外对昆虫病原线虫的分类研究主要集中在形态学和生物化学等方面,运用分子生物学技术对线虫系统发育进行研究还处在起步阶段。本研究应用PCR扩增并测定了根据形态学鉴定方法鉴定出的在甘肃省采集的29个不同地理群体8种昆虫病原线虫的rDNA序列,获得26S DNA基因约1100bp长度的序列片段,结果显示所测定的序列都具有较强的系统发育信号。鉴定结果与实验室采用形态学方法对这些线虫进行详细鉴定所得的结果完全一致。鉴于线虫混合虫口问题和种间差异不显著等特点,本研究摸索出单条线虫PCR扩增的成熟条件对全部29个地理群体的线虫样品ITS区进行了PCR扩增,结合Genbank上的昆虫病原线虫序列做出了系统发育树。用Alul限制性内切酶对扩增产物进行了RFLP分析,结果表明:不同地理种群的线虫ITS区扩增片段长度均在1100bp左右,酶切图谱种间差异不大,也不存在种内群体的变异多态性。本研究提供了一个对大量昆虫病原线虫样本进行快速初步鉴定的方法,对昆虫病原线虫资源调查和分子系统学等方面的研究具有重要意义。对在甘肃省采集的8种昆虫病原线虫进行了抗干燥能力测定,结果表明:昆虫病原线虫种类不同,其抗干燥能力也不同。在25℃、相对湿度50.5%的小空间控制器中分别处理5小时、7小时和9小时后,斯氏线虫仍具有较高的存活率,而异小杆类线虫几乎全部死亡。经干燥处理后Steinernema krussei存活率最高,加水复苏后的线虫对大蜡螟的致死率为100%。

全文目录

摘要  2-3
Summary  3-6
前言  6-8
第一章文献综述  8-19
  1 昆虫病原线虫的概述  8-11
    1.1 昆虫病原线虫的分类  8-9
    1.2 昆虫病原线虫的分类研究现状  9-10
    1.3 我国的昆虫病原线虫资源现状及种类  10-11
  2 鉴定分类的研究  11-16
    2.1 形态分类法  11-12
    2.2 分子分类和鉴定  12-16
  3 昆虫寄生线虫的分子生物学研究  16-18
    3.1 斯氏线虫科和小杆科  17
    3.2 昆虫寄生索科线虫  17-18
  4 本研究的目的与思路  18-19
第二章材料与方法  19-27
  1 甘肃省昆虫病原线虫的分子生物学鉴定  19-25
    1.1 昆虫病原线虫的繁殖  19-20
    1.2 昆虫病原线虫的DNA 提取  20-22
    1.3 ITS－PCR 扩增  22-23
    1.4 凝胶成像  23-24
    1.5 PCR 产物的纯化  24
    1.6 PCR 产物的酶切和电泳  24-25
    1.7 DNA 序列测定与分析  25
    1.8 线虫共生菌的分离  25
  2 甘肃省昆虫病原线虫的抗干燥能力测定  25-27
    2.1 供试线虫和供试昆虫  25-26
    2.2 小空间湿度控制器的制作  26
    2.3 抗干燥昆虫病原线虫的筛选  26-27
第三章结果与分析  27-35
  1 甘肃省昆虫病原线虫的分子生物学鉴定  27-33
    1.1 昆虫病原线虫的DNA 检测结果  27-28
    1.2 昆虫病原线虫ITS 的PCR 扩增检测结果  28-29
    1.3 昆虫病原线虫的RFLP 分析  29-30
    1.4 所测昆虫病原线虫rDNA 的序列比对结果  30-33
  2 甘肃省昆虫病原线虫抗干燥能力测定  33-35
    2.1 经干燥处理后昆虫病原线虫的存活率  33-34
    2.2 复苏线虫对大蜡螟的致死率和侵入率  34-35
第四章讨论与结论  35-38
  1 讨论  35-36
    1.1 昆虫病原线虫的分子生物学鉴定  35
    1.2 昆虫病原线虫的抗干燥能力测定  35-36
  2 结论  36-38
致谢  38-39
参考文献  39-46
作者简介  46-47
导师简介  47-49

甘肃省昆虫病原线虫分子生物学鉴定

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