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吉非替尼不同时相序贯联合顺铂对人腺癌A549细胞作用的体外实验研究

作　者: 疏林
导　师: 施敏骅
学　校: 苏州大学
专　业: 呼吸内科学
关键词: 吉非替尼 顺铂 Rad51蛋白 A549 NSCLC
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的研究吉非替尼(Gefitinib,G)在不同时相序贯联合顺铂(Cisplatin ,P)对人腺癌A549细胞的体外生长抑制作用及对细胞中Rad51蛋白表达水平的影响,探索EGFR-TKI序贯联合化疗药物治疗NSCLC的效果及机理,为临床选择合理的联合方案提供实验依据。方法(1)取吉非替尼终浓度5μmol/L在不同时相序贯联合不同浓度顺铂(0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0μg/ml)时作用于人腺癌A549细胞,实验分为A组(P-G模式)以不同浓度梯度顺铂单独作用人腺癌A549细胞24小时后洗脱药物再加吉非替尼作用48h;B组(PG模式)以吉非替尼联合上述梯度浓度顺铂处理A549细胞24h,洗脱药物后再加吉非替尼作用24h; C组(G-P模式)先用吉非替尼预处理48h后洗脱吉非替尼再加入顺铂作用24h,MTT法分别检测各组OD值并计算细胞生长抑制率和IC50,绘制细胞生长抑制率-药物浓度曲线;(2)以顺铂(终浓度1μg/ml)在不同时相序贯联合吉非替尼(终浓度5μmol/L)作用于人腺癌A549细胞,实验分组、作用方式同(1),增设对照组D组,不添加任何药物。流式细胞学检测不同分组人腺癌A549细胞周期和凋亡率;(3)采用Western blot技术检测吉非替尼在不同时相序贯联合顺铂对人腺癌A549细胞中Rad51蛋白表达水平,实验分组及处理方式同(2)。结果(1)与A组的IC50(1.21μg/ml)相比,B组和C组IC50明显升高,分别为3.62μg/ml和4.43μg/ml,差异有统计学意义(P <0.05),B组和C组细胞生长抑制率-药物浓度曲线较A组不同程度右移。(2)A、B、C、D四组A549细胞S期和G0-G1期细胞比例分别为(5.95±0.14,51.51±1.34)%、(7.52±0.17,86.51±1.91)%、(30.89±1.01,22.19±0.71)%和(34.55±0.84,52.01±2.44)%,A、B两组G0-G1期细胞的比例与C组相比明显增加(P <0.05),而C组S期细胞比例较另外两组明显增加(P <0.05);A、B、C、D四组A549细胞凋亡率分别为(34.74±0.94)%、(6.09±0.22)%、(2.14±0.09)%和(1.28±0.17)%。其中A、B组细胞凋亡率高于对照组D组(P <0.05),尤以A组细胞凋亡率最高(P <0.05),C组细胞凋亡率和D组无差别(P>0.05)。(3) A、B、C、D组Rad51蛋白表达量(用灰度值表示)分别为20.01±2.73、40.63±4.26、42.83±3.63和13.11±2.65;与对照组D组相比,各处理组Rad51蛋白表达水平均有不同程度提高(P <0.05),其中B,C组中Rad51蛋白表达量较A组升高明显(P <0.05),B,C组中Rad51蛋白表达量无统计学差异(P>0.05)。结论(1)P-G序贯模式对人腺癌A549细胞较PG联合和G-P序贯模式的活性抑制作用更强。(2)G-P序贯模式未能有效增加人腺癌A549细胞的凋亡率,P-G序贯和PG联合模式能有效增加人腺癌A549细胞的凋亡率,前者对A549细胞的促凋亡作用更强。(3)和其他联合序贯模式相比,P-G序贯模式可以有效降低顺铂诱导的人腺癌A549细胞中DNA修复蛋白Rad51蛋白的表达,增加肿瘤细胞的凋亡,有助于增加化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-9
引言  9-11
试剂器材  11-14
实验方法  14-20
  实验一 吉非替尼不同时相序贯联合顺铂对化疗药物 IC50 的影响和细胞生长抑制作用  14-15
  实验二 吉非替尼不同时相序贯联合顺铂对A549 细胞生长周期和凋亡的影响  15-16
  实验三 吉非替尼不同时相序贯联合顺铂对A549 细胞中Rad51 蛋白表达的影响  16-20
结果  20-24
讨论  24-27
结论  27-28
参考文献  28-32
综述  32-45
中英文对照缩略词表  45-46
攻读学位期间公开发表的论文  46-47
致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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