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工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞自噬的诱导作用

作　者: 陈清凤
导　师: 曾群力
学　校: 浙江大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 细胞自噬极低频磁场中国仓鼠肺成纤维细胞
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：随着电力事业的发展,人群接触极低频磁场的时间和强度愈来愈大,人们对极低频磁场的效应也愈加关注。早期的研究表明极低频磁场可以诱导细胞分子水平的改变,如：细胞缝隙连接功能(GJIC)下降、细胞膜表皮生长因子受体(EGFR)和肿瘤坏死因子受体(TNFR)聚簇,以及基因和蛋白质表达谱发生改变等等。细胞自噬是机体重要的一种防御和保护机制,它大量降解并重复利用长寿命蛋白质、大分子物质以及细胞内受损的细胞器等,使细胞能够在饥饿环境下得以生存,细胞自噬和神经退行性疾病、衰老以及肿瘤相关。有研究发现电离辐射如γ射线,非电离辐射如紫外线等均会诱导细胞自噬效应,本研究初步探索与人们日常生活密切相关的工频磁场(50Hz0.4mT)对中国仓鼠肺成纤维细胞(Chinese hamster lung cells, CHL)的细胞自噬的诱导。方法：CHL细胞培养24小时,更换新鲜的培养基后进行50Hz0.4mT工频磁场暴露30分钟、2小时、6小时、12小时或者24小时,磁场暴露后通过以下三种方法检测细胞自噬水平：透射电镜观察细胞内空泡变化,激光共聚焦显微镜检测细胞内GFP-LC3定位自噬小体情况以及Western Blot实验检测细胞内LC3-Ⅱ表达。结果：透射电子显微镜观察到,工频磁场暴露30分钟和24小时诱导细胞内空泡增加；激光共聚焦显微镜观察到,在GFP-LC3高表达的CHL细胞内,工频磁场暴露不同时间点诱导GFP-LC3亮点标记的自噬小体增加(P>0.05),30分钟和24小时升高趋势较为明显；Western Blot技术检测发现磁场暴露促进自噬的特异性标记蛋白LC3-Ⅱ表达增加(P>0.05),30分钟和24小时升高趋势较为明显；加入自噬小体与溶酶体融合的阻断剂氯喹后,磁场暴露30 min自噬流量增加(P<0.05)。结论：这些研究提示本实验条件下50Hz0.4mT工频磁场暴露可能诱导CHL细胞自噬效应。

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致谢  4-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
缩略语  10-11
目次  11-12
1 前言  12-16
2 主要仪器设备、材料与试剂  16-22
  2.1 主要仪器设备耗材  16
  2.2 细胞、细菌及其培养液  16-17
  2.3 主要试剂  17-18
  2.4 试剂配制  18-22
3 实验方法  22-27
  3.1 sXc-ELF工频磁场辐照系统  22-23
  3.2 细胞培养与分组  23
  3.3 工频磁场诱导细胞自噬的检测  23-27
4 实验结果  27-35
  4.1 工频磁场诱导CHL细胞内自噬空泡的改变  27-29
  4.2 工频磁场对CHL细胞内自噬小体定位的影响  29-31
  4.3 工频磁场对CHL细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达的影响  31-33
  4.4 工频磁场对细胞内自噬流量的影响  33-35
5 讨论  35-37
6 结论  37-38
参考文献  38-41
综述  41-47
  参考文献  45-47
作者简历及在学期间所取得的科研成果  47

工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞自噬的诱导作用

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