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大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞分化成骨样细胞能力对比研究

作　者: 翟旭
导　师: 吕长胜
学　校: 北京协和医学院
专　业: 外科学
关键词: 牙髓干细胞骨髓间充质干细胞培养诱导成骨样细胞
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的提取大鼠牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)与骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells, BMSCs),传代培养观察二者形态学,以及其生长差异。免疫荧光染色观察大鼠牙髓干细胞标志物表达。通过矿化诱导,观察大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞向成骨样细胞分化能力,并通过免疫荧光对其进行表面成骨标志物检测,观察其钙化结节形成能力,对比讨论大鼠牙髓干细胞的成骨样细胞分化能力与特点。方法通过离心法获得大鼠骨髓细胞,全骨髓体外贴壁培养扩增,并通过倒置显微镜观察其形态；通过酶消化法处理大鼠牙髓组织获得牙髓干细胞,体外培养扩增,通过倒置显微镜观察形态。通过流式细胞仪检测所获得细胞表面CD45,CD90分子表达；通过免疫荧光染色检测细胞表面STRO-1表达；MTT法分别测得大鼠骨髓间充质干细胞与牙髓干细胞的生长曲线,对照分析,比较二者在生长扩增上的差异；分别对大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞进行矿化诱导培养,2周后对其进行骨钙素(OCN),牙本质泌涎蛋白(DSP)免疫荧光染色；继续培养四周,对经诱导的大鼠牙髓干细胞进行茜素红染色观察钙结节形成情况。结果通过离心法获得的大鼠骨髓细胞经过贴壁培养,换液逐渐将造血系细胞清除,得到相对纯度较高的骨髓间充质干细胞贴壁生长；通过酶消化法获得的大鼠牙髓干细胞第二天可完全贴壁生长；所获得的细胞经流式细胞仪检测CD45表达阴性,CD90表达阳性,符合间充质干细胞特性；免疫荧光染色STRO-1表达阳性,符合干细胞表达特性；MTT法绘制生长曲线可见大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞第4天左右进入生长对数期,牙髓干细胞生长增殖速度快于骨髓间充质干细胞；经过矿化诱导2周后骨髓间充质干细胞与牙髓细胞表达成骨细胞表面标志物OCN阳性,牙髓干细胞表达牙本质细胞标志物DSP阳性；经4周矿化诱导培养,大鼠牙髓干细胞茜素红染色证实有矿化结节生成。结论通过离心获得的骨髓细胞经全骨髓贴壁培养可随着贴壁换液的进行逐渐将造血系细胞清除获得纯度较高的骨髓间充质干细胞,其表面标志物检测证实纯度可达80%以上；酶消化法获得的大鼠牙髓干细胞表面标志物表达符合间充质干细胞特点,且生长扩增能力强；通过矿化诱导培养,牙髓干细胞可向成骨样细胞分化,能力与骨髓间充质干细胞相当,并可形成矿化结节。牙髓干细胞具有较强的增殖能力,并具有成骨样细胞分化能力,可以作为干细胞治疗骨组织缺损修复的理想种子细胞。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
综述一  8-13
综述二  13-22
前言  22-24
大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞分化成骨样细胞能力对比研究  24-36
  材料与方法  24-29
  结果  29-30
  讨论  30-36
全文结论  36-37
参考文献  37-43
附图  43-50
英文缩略词表  50-52
致谢  52-54
个人简历  54-55

大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞分化成骨样细胞能力对比研究

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