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血管过氧化物酶促2型糖尿病血管内皮功能损伤作用
作 者: 刘思妤
导 师: 李元建
学 校: 中南大学
专 业: 药理学
关键词: 2型糖尿病 内皮细胞 衰老 炎症 血管过氧化物酶
分类号: R587.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 46次
引 用: 1次
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内容摘要
研究背景糖尿病患者伴随血管内皮受损,表现为内皮细胞衰老与血管内皮依赖性舒张功能减弱。糖尿病时血管内皮受损的机制尚未完全明了。糖尿病时存在着氧化和抗氧化机制的紊乱,导致活性氧(ROS)增多。ROS除了灭活一氧化氮(NO)外,还参与炎症反应,促进细胞损伤。ROS的生成受多种酶类催化,其中H2O2经髓氧化物酶(MPO)催化生成毒性更大的HOCl,HOCl除了可直接损伤细胞外,还参与炎症反应。新近发现,内皮等细胞存在一种具有MPO相同功能的过氧化物酶,能催化H2O2生成HOCl,称为血管过氧化物酶(VPO)。本实验在2型糖尿病大鼠观察VPO与血管内皮细胞损伤的关系,然后在培养内皮细胞,运用基因沉默技术进一步证实VPO在促进细胞损伤中的重要作用。方法动物实验:实验分设两组:正常对照组,给予普通饲料;糖尿病动物组,高脂饲料饲养4周,单次腹腔注射STZ(35mg/kg),继续高脂饲养8周。实验结束时,获取血浆测定TNF-α与MCP-1的浓度(ELISA法),并取胸主动脉检测血管内皮依赖性舒张反应及血管组织中VPO mRNA水平(实时定量PCR法)。细胞实验:培养人脐静脉内皮细胞株,不同浓度高糖(10、20、30mM)处理,以蔗糖为对照。检测细胞活性、β-半乳糖苷酶染色(反映衰老)、TNF-α与MCP-1水平(ELISA法)与VPO mRNA与蛋白表达。在此基础上,观察VPO干扰对高糖所致细胞损伤的影响。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血糖、血脂及胰岛素抵抗指数明显升高。糖尿病大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张反应明显降低,血浆中TNF-α和MCP-1的浓度显著增加,同时血管组织VPO mRNA表达水平显著增高。与正常对照组比较,高糖孵育48 hβ-半乳糖苷酶染色阳性的内皮细胞显著增加,培养液中TNF-α和MCP-1水平增高,并能浓度依赖性地上调VPO mRNA及蛋白的表达。VPO shRNA干扰能显著抑制高糖所致β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加,以及TNF-α和MCP-1水平升高。结论2型糖尿病血管受损与VPO生成增加有关,VPO通过诱导氧化应激和炎症反应从而降低内皮细胞NO的生物利用与促细胞衰老。
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全文目录
中文摘要 4-6 英文摘要 6-10 符号说明 10-11 第一章 前言 11-14 第二章 材料与方法 14-22 2.1 材料 14-15 2.1.1 主要试剂 14-15 2.1.2 主要仪器设备 15 2.2 Ⅱ型糖尿病模型制备 15-16 2.3 在体动物观测指标 16-18 2.3.1 葡萄糖耐量 16 2.3.2 离体胸主动脉内皮依赖性舒张功能 16 2.3.3 血清MCP-1,TNF-α水平检测 16-17 2.3.4 检测大鼠胸主动脉VPO mRNA的表达 17-18 2.4 人脐静脉内皮细胞培养 18-19 2.5 人脐静脉内皮细胞观测指标 19-20 2.5.1 细胞活性 19 2.5.2 细胞衰老 19 2.5.3 内皮细胞VPO的mRNA的表达 19-20 2.5.4 细胞上清MCP-1,TNF-α浓度 20 2.5.5 VPO蛋白的表达 20 2.6 VPO shRNA对人脐静脉内皮细胞的影响 20-21 2.7 实验结果的统计学处理 21-22 第三章 结果 22-35 第四章 讨论 35-38 第五章 结论 38-39 参考文献 39-44 综述 44-53 参考文献 50-53 致谢 53-54 攻读硕士学位期间主要研究成果 : 54
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病性昏迷及其他并发症
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