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VPA联合DAC抗白血病效应与分子机制

作　者: 黄昌发
导　师: 刘小珊
学　校: 汕头大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 丙戊酸 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 白血病 PcG蛋白家族 DNMTs
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


表观遗传异常如基因组启动子区CpG岛异常甲基化以及核心组蛋白的异常修饰等同肿瘤发生密切相关。由于表观遗传修饰的可逆性特点,可影响细胞表观遗传的化合物如DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases, DNMTs)和组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases, HDACs)抑制剂多具有明显的抗肿瘤活性。既往研究表明虽然组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA和DNA甲基转移酶抑制剂DAC各自具有抗白血病效应,但对某些白血病患者而言,两药联合后具有更好的临床治疗效果。目前有关VPA联合DAC提高抗白血病效应的分子机制并不完全清楚,随着白血病相关发病分子机制的阐明以及白血病的个体化治疗方案的实施,如果能进一步明确VPA联合DAC抗白血病效应的分子机制,将有助于此联合方案在临床上的合理应用。为探明VPA联合DAC抗白血病的分子机制,本文首先利用MTT实验证实VPA联合DAC对几种白血病细胞株的增殖抑制作用以及利用Western blot检测PARP剪切片段观察了VPA联合DAC诱导白血病K562细胞的凋亡。在此基础上,采用RT-PCR观察了VPA与DAC单独与联合时对K562细胞中Polycomb Group(PcG)蛋白家族中YY1,EZH2,Bmi1和DNA甲基转移酶DNMT1/3b的mRNA水平的影响。方法:第一部分:1.利用选定浓度的VPA和DAC单独或联合作用K562、HL-60、U937细胞4天,MTT法检测细胞增殖能力变化。2.利用选定浓度的VPA和DAC单独或联合作用K562细胞4天,提取细胞总蛋白,Western blot检测PARP,观察有无细胞凋亡发生。第二部分:1.利用选定浓度的VPA和DAC单独或联合作用K562细胞4天,提取细胞总RNA,RT-PCR检测YY1,EZH2,Bmi-1 mRNA表达水平变化。2.利用选定浓度的VPA和DAC单独或联合作用K562细胞4天,提取细胞总RNA,RT-PCR检测DNMT1/3b mRNA表达水平变化。结果:第一部分:1. VPA联合DAC对K562和HL-60细胞增殖抑制具有明显协同效应,对U937的增殖抑制无明显协同效应。2. VPA和DAC单独处理K562细胞,PARP无明显剪切,两药联合后PARP出现了明显剪切。第二部分:1. VPA与DAC单独作用均能显著抑制YY1基因表达,对EZH2和Bmi1的表达也有一定抑制作用,但抑制作用较YY1弱;两药联合作用时,对三种基因表达的抑制作用较单独作用时弱。2. VPA与DAC单独作用能显著抑制DNMT1/3b的表达,而当两药联合作用时其抑制作用不及单独作用时明显。结论:1. VPA联合DAC对白血病细胞体外增殖抑制作用具有协同效应,此效应具有细胞特异性;另外此增殖抑制作用可伴有细胞凋亡发生。2.VPA联合DAC对K562细胞YY1,EZH2,Bmi-1,DNMT1/3b mRNA表达水平的抑制无明显协同效应。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
缩写词简表  9-10
前言  10-16
  参考文献  13-16
第一部分 VPA 联合DAC 对白血病细胞增殖抑制与凋亡诱导作用  16-30
  1 实验材料  16-21
  2 实验方法  21-26
  3 实验结果  26-28
  4 讨论  28-29
  5 参考文献  29-30
第二部分 VPA 联合DAC 对K562 细胞PcG 及DNMTs mRNA 表达的影响  30-42
  1 实验材料  31-32
  2 实验方法  32-36
  3 实验结果  36-38
  4 讨论  38-39
  5 参考文献  39-42
全文结论  42-43
文献综述  43-52
  参考文献  49-52
致谢  52-53
附录  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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