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南蛇藤抗炎及免疫抑制活性部位的研究

作　者: 季春
导　师: 佟丽
学　校: 南方医科大学
专　业: 中药学
关键词: 南蛇藤属过山枫抗炎活性部位
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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引　用: 3次
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内容摘要

类风湿性关节炎是一种慢性的、致残性自身免疫性疾病,其发病率为0.3%-1%,我国大约有400万患者。治疗类风湿性关节炎的常规用药包括糖皮质激素(例如,可的松和强的松),非甾体抗炎药物(NSAIDS;布洛芬和萘普生),缓解病情的抗风湿药物(DMARDs;甲胺喋呤(MTX)和来氟米特),生物制剂(肿瘤坏死因子-α抑制剂)。除了其高成本外,长期使用过多的上述药物通常导致严重的不良反应及毒副反应,还包括正在接受生物制剂治疗患者的多系统感染风险。因此,基于中药或天然植物产品类的补充和替代药物(CAM)的替代疗法,由于其较好的临床疗效、较少的毒副作用及可长期用药的可能性,越来越受到临床医学的重视及患者的欢迎。南蛇藤属卫矛科南蛇藤属植物,中国民间以根,茎,叶和藤用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、腰痛等病证。过山枫(Celastrus aculeatus Merr)是南蛇藤属植物,在中医临床上作为南蛇藤药材来源之一。我们的前期药理学实验已证明,过山枫乙醇提取物具有抗炎及镇痛作用,对佐剂性关节炎大鼠关节炎症具有显著的抑制作用。但是,过山枫中究竟是哪些成分在发挥药效作用,迄今为止国内外尚无研究报告。阐明过山枫中抗炎及抑制免疫的活性部位及有效成分,对过山枫的药物开发将具有重要的意义。本课题采用药理学追踪指导化学活性分离的方法,应用现代层析技术及波谱方法从过山枫中分离活性部位并鉴定代表化合物化学结构;同时,运用快速细胞培养MTT的实验手段,从体外的角度验证过山枫活性部位对T淋巴细胞增殖的抑制作用,以期明确其抗炎及抑制免疫的活性部位,并发现该部位中的代表化合物,作为质量控制的参考。1南蛇藤属植物资源调查目的概述南蛇藤属植物的种属分类,形态特征及地理分布,了解南蛇藤属化学成分及药理活性的研究进展。方法采用本草考证和文献调研的方法对南蛇藤属植物的研究进展做一综述。结果我国产南蛇藤属植物30种,分布广泛;迄今为止共从南蛇藤属植物中分离得到最多的成分是倍半萜及倍半萜衍生物,其中得到148余种倍半萜,主要存在于该属植物的根皮、叶、种子中。三萜类成分主要存在于南蛇藤属植物的根皮中,主要类型有羽扇豆烷型和齐墩果酸型。目前报道的大约有14种,其中报道最多见的是南蛇藤素。在南蛇藤属植物中还发现了二萜成分,到目前为止报道的有4种。黄酮类化合物主要存在于南蛇藤属植物的叶中。另有其它几类物质。南蛇藤属植物及其提取物或成分具有多种生理药理活性。这些生理药理活性主要包括抗肿瘤、抗炎及抗病原微生物作用;抗生育作用和抗氧化作用。以及昆虫拒食作用、松弛平滑肌作用、抑菌抑病毒作用等。结论南蛇藤属植物资源丰富,价廉易得,而其中发现的大部分化学成分药理活性明确,且目前所用于治疗的疾病多为临床疑难杂症,所以具有很好的开发利用价值。2过山枫抗炎及免疫抑制部位的提取分离目的过山枫(Celastrus aculeatus Merr)中的抗炎及免疫抑制部位活性部位提取分离方法的研究方法95%食用乙醇提取过山枫粗粉,水沉工艺除杂,获得过山枫乙醇浸膏。称取过山枫醇提物,以适量硅藻土拌样,投入索氏提取器中,以20倍量石油醚/乙酸乙酯/正丁醇分别进行提取。获得不同极性的部位。经化学方法和体外生物学方法检测后,确定过山枫抗炎活性部位。结果初步确定过山枫中总三萜提取分离工艺及方法。结论经实验检测证明过山枫乙醇提取物的乙酸乙酯部分可能为三萜富集部位,具有一定抗炎活性。3过山枫总三萜定性定量测定目的建立过山枫(Celastrus aculeatus Merr)总三萜提取物定性定量测定方法。方法以TLC方法,试验不同溶剂系统上行展开,采用硫酸乙醇,加热显色,建立过山枫所含的总三萜定性测定方法。采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法,建立过山枫提取物中的总三萜类成分含量测定方法。结果过山枫中三萜类成分TLC条件为:石油醚:乙酸乙酯:氯仿:冰醋酸=6:2:1:0.1;以10%硫酸乙醇于120℃显色5分钟,可见紫红色或蓝紫色斑点。过山枫总三萜类成分平均含量为37.93%,RSD=1.60%(n=5);过山枫药材总三萜类成分平均含量为12.87%,RSD=3.39%(n=5)。过山枫乙醇提取物石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位总三萜类成分平均含量分别为41.57%,RSD=3.28%(n=5);48.34%,RSD=2.97%(n=5);39.82%,RSD=4.13%(n=5)。结论本实验所建立的方法可作为南蛇藤药材及提取物总三萜质量评估的一种检测手段。4过山枫不同极性部位对体外培养小鼠淋巴细胞增殖作用的影响目的检测过山枫不同极性提取物对小鼠淋巴细胞增殖作用的影响。方法采用小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,观察过山枫不同活性部位对淋巴细胞增殖的抑制作用,以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法进行测定。结果石油醚1组、乙酸乙酯1组、正丁醇2组与ConA组相比较,结果有显著性差异。(~*P＜0.05)结论过山枫乙醇提取物石油醚1组、乙酸乙酯1组、正丁醇2组与ConA组相比较,对小鼠T淋巴细胞增殖均有明显的抑制作用。其中以石油醚1组、乙酸乙酯1组的作用更强。且各组抑制作用均表现出一定的量效关系。5过山枫醇提物乙酸乙酯部位柱分离及鉴定方法提取过山枫乙醇提取物的乙酸乙酯部分,并进行反复柱色谱,以光谱方法对分离得到的单体进行结构鉴定。结果:分离并鉴定了1个化合物,共获得结晶97mg,得率为0.47%,鉴定为β-谷甾醇。结论:该化合物在过山枫抗炎活性部位中含量较高,且为首次在该植物中发现。

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