学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

益母草碱对大鼠心肌细胞离子通道作用的研究

作　者: 顾明
导　师: 张雪梅；辛宏；王文伟
学　校: 复旦大学
专　业: 药理学
关键词: L-型钙通道电流 益母草碱 心室肌细胞 离子通道 动作电位 膜片钳 电生理
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 216次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


益母草碱是传统中药益母草中的一种生物碱,几千年来用于治疗妇女痛经、月经不调及其他妇科疾病。研究发现益母草碱具有广泛的药理活性。近年来在国内,有不少以益母草为主要成分的药物制剂在临床上用来治疗心肌缺血。然而,到目前为止,我们还不明白益母草碱是否对心肌细胞膜上的离子通道有作用。在本次实验的第一部分中,我们利用全细胞膜片钳技术研究了益母草碱对单个成年大鼠心肌细胞跨膜离子转运的影响。这部分的实验结果表明,益母草碱能够可逆性的抑制L-型钙通道电流(I（Ca）,L),并且抑制作用服从剂量依赖性(在钳制电压为-40 mV时,半数有效抑制浓度IC50值约为18μM)。益母草碱对于钠电流(INa)和钾电流（IK）没有明显作用（实验中使用的最大浓度达到200μM）。20和100μM益母草碱都能显著缩短心肌动作电位时程（APD 50及APD 90）。在第一部分的实验结果中,益母草碱对钙通道的抑制作用最令我们感兴趣,因为很多经典的具有心肌保护作用的药物具有类似的药理功效（如硝苯地平）。因此我们进一步研究了益母草碱钙通道阻断作用的机制。我们发现有两点可能与此有关:一是益母草碱能够影响钙通道的动力学特征,二是益母草碱能影响钙通道的蛋白表达。在对钙通道动力学的研究过程中,我们发现20和100μM的益母草碱都能使钙通道的激活和稳态失活曲线向负电位方向移动。除此之外,上述剂量的益母草碱还能延长钙通道失活以后的复活时间。接着,我们在第二部分研究中用分子生物学方法观察了益母草碱对L-型钙通道α1C亚基mRNA和蛋白表达的影响情况。实验中,我们以原代培养的新生大鼠心肌细胞为研究对象,主要依靠RT-PCR及Western blot技术检测分析相应基因的表达量。实验结果:心肌细胞在不同剂量的益母草碱（5,10,20,50,100和200μM）作用后,其心肌细胞钙通道α1C亚基的mRNA表达量明显下降,较对照组相比分别下降了11.9%,28.4%,47.8%,50.8%,47.8%和46.3%。同时,心肌细胞钙通道α1C亚基的蛋白表达量在益母草碱作用后也明显下降,较对照组相比分别下降了8.4%,28.2%,47.9%,60.1%,66.2%和592%。上述结果表明:益母草碱对心肌细胞L-型钙通道mRNA和蛋白的表达具有抑制作用。综上,对于本次研究,我们的结论是:益母草碱能够部分通过影响钙通道的动力学特征和蛋白表达,进而抑制I（Ca）,L来发挥它的心肌保护作用

全文目录


缩略词表  6-7
摘要  7-8
Abstract  8-10
第一部分 益母草碱对大鼠心肌细胞离子通道作用的电生理研究  10-43
  1. 引言  10-12
  2. 材料与方法  12-18
    2.1 主要材料与试剂  12-15
    2.2 主要实验仪器和设备  15
    2.3 实验方法  15-18
      2.3.1 急性分离成年大鼠心室肌细胞  15
      2.3.2 形成全细胞记录模式  15-16
      2.3.3 心室肌细胞I_((Ca),L)的记录与分析  16-17
      2.3.4 心室肌细胞I_K的记录与分析  17
      2.3.5 心室肌细胞I_(Na)的纪录与分析  17
      2.3.6 心室肌细胞动作电位的记录与分析  17
      2.3.7 统计学处理  17-18
  3. 结果  18-34
    3.1 胶原酶酶解法分离单个成年大鼠心肌细胞  18-19
    3.2 益母草碱抑制心肌细胞膜L-型钙电流  19-28
    3.3 益母草碱对心肌细胞膜钾电流作用不明显  28-30
    3.4 益母草碱对心肌细胞膜钠电流作用不明显  30-32
    3.5 益母草碱对心肌动作电位的影响  32-34
  4. 讨论  34-39
  5. 参考文献  39-43
第二部分 益母草碱对新生大鼠心肌细胞Ca_(v1.2)基因mRNA和蛋白表达影响的研究  43-67
  1. 引言  43-45
  2. 材料与方法  45-55
    2.1 主要材料与试剂  45-46
    2.2 主要实验仪器和设备  46
    2.3 实验方法  46-55
      2.3.1 新生大鼠心肌细胞原代培养  46-47
      2.3.2 心肌Ca_(v1.2)和GAPDH片段特异性引物的设计  47
      2.3.3 提取心肌总RNA及RT-PCR对Ca_(v1.2) mRNA表达的鉴定  47-49
      2.3.4 提取心肌总蛋白及Western blot对Ca_(v1.2)蛋白表达的鉴定  49-54
      2.3.5 统计学处理  54-55
  3. 结果  55-61
    3.1 蛋白酶酶解法原代分离新生大鼠心肌细胞  55-56
    3.2 心肌细胞上Ca_(v1.2)和GAPDH目的基因引物的设计  56-57
    3.3 益母草碱抑制心肌细胞上Ca_(v1.2) mRNA表达  57-59
    3.4 益母草碱抑制心肌细胞上Ca_(v1.2)蛋白表达  59-61
  4. 讨论  61-65
  5. 参考文献  65-67
结论  67-68
研究方向  68-69
综述  69-79
致谢  79-80
论文发表  80-81

相似论文

  1. 基于细胞电生理模型的膜片钳实验仿真平台设计与实现,R318.0
  2. 马铃薯甲虫对拟除虫菊酯类杀虫剂和硫丹的抗性及其机理,S435.32
  3. 水稻硝转运蛋白基因OsNRT1.1a和OsNRT1.1b的功能研究,S511
  4. 依普拉芬对体外鸡胚小肠上皮细胞新型钙离子通道表达的影响,S831
  5. 芍药甙调节Oddi括约肌肌细胞运动及钾离子通道机制的研究,R285
  6. 大鼠皮层神经细胞膜离子通道电流测量与重构,Q42
  7. 栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代CLC1基因鉴定和功能的初步研究,S565.1
  8. 纳洛酮对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响,R965
  9. 对IVM影响大鼠P2X4离子通道失活效应的研究,Q25
  10. 基于Qt/E的嵌入式膜片钳系统设计,TP368.1
  11. 芹菜素与槲皮素的结构修饰及5-PBDMA对hERG钾通道的影响,R285
  12. 水通道4敲除对小鼠急性应激行为的影响及其机制,R965
  13. 基于嵌入式技术的膜片钳数据采集系统硬件设计,TP274.2
  14. 钙离子通道蛋白MidA在构巢曲霉中的功能特征研究,Q78
  15. 基于神经电生理学的着装接触舒适性研究,Q42
  16. ~（125）Ⅰ放射性粒子植入对外周神经组织的影响,R817.4
  17. 二十二碳六烯酸对大鼠心室肌细胞电生理作用及抗心律失常机制,R965
  18. 酸敏感离子通道在心肌上的表达和分布及其电生理特性,R96
  19. 儿茶素对酸介导神经元损伤的保护作用及其机制研究,R743.3
  20. EPPIN基因多态性及低表达对雄性生殖功能的影响,R698.2
  21. pIRES-GFP-hPENK的构建及其鞘内注射的表达,R450

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
© 2012 www.xueweilunwen.com