学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

福建省两种双生病毒的致病机制研究

作　者: 张洁
导　师: 吴祖建
学　校: 福建农林大学
专　业: 微生物学
关键词: 野葛花叶病毒分离物Yg3 胜红蓟黄脉病毒福建烟草分离物F2 侵染性克隆致病机制
分类号: Q939.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 56次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminiviruses, WTGs,双生病毒科)具有孪生颗粒形态的植物单链环状DNA病毒,是世界多种重要经济作物生产上的危害之一,已在多个国家和地区的作物上造成毁灭性危害。近年来,我国华南各省的杂草上也都发现有双生病毒,并有逐年加重的趋势。本文对福建省杂草上的双生病毒进行了鉴定,并对其致病机制作了初步研究。从福建省福州地区采集了表现有典型双生病毒症状的野葛(Pueraria montana)病样,通用引物PA/PB对野葛样品进行了特异PCR检测,结果发现,样品中有大约500 bp的条带,表明此野葛中极有可能含有双生病毒。随机选择了三个克隆Yg1、Yg2及Yg3进行序列测定,测序结果表明此三个克隆之间的差异极小,核苷酸序列同源性均在98.8%以上(登录号FJ539016, FJ539017和FJ539018),说明此样品很可能是由同一种双生病毒侵染。在此基础上,我们对Yg3样品中的双生病毒的全基因组进行了研究。通过一对背靠背引物获得了Yg3的全基因组序列,测序表明,Yg3 DNA-A全长2729 nt (登录号FJ539014),具有典型的粉虱传双生病毒特征:共编码6个开放阅读框(open reading frames, ORF),其中正义链编码2个ORFs,分别为AV1和AV2,反义链编码AC1、AC2、AC3和AC4四个ORFs,其茎环结构区含有TAATATTAC保守序列。经NCBI检索和BLAST比对发现,Yg3 DNA-A与野葛花叶病毒DNA-A(Kudzu mosaic virus-[Vietnam:Hoabinh:2005] DNA-A,KuMV-[VN:Hoa:05] DNA-A,登录号DQ641690)同源性最高,为92.9%。用Beta01/Beta02特异引物并未发现有DNA-β存在,然而用TempliPhiTM Kit试剂盒扩增得到2677 bp的片段(登录号FJ539015),NCBI BLAST比对发现其与野葛花叶病毒DNA-B(Kudzu mosaic virus-[Vietnam:Hoabinh:2005] DNA-B,KuMV-[VN:Hoa:05] DNA-B,登录号DQ641691)同源性最高,为81.7%。由此,我们确定Yg3为野葛花叶病毒(Kudzu mosaic virus,KuMV)的一个分离物,并将其命名为野葛花叶病毒分离物Yg3(Kudzu mosaic virus Yg3 isolate,KuMV-Yg3)。Yg3 DNA-B编码两个ORFs,即反义链上的BC1和正义链上的BV1,同时也含有保守序列TAATATTAC。为了研究KuMV DNA-A和DNA-B在致病中的作用,我们构建了KuMV-Yg3 DNA-A和DNA-B的侵染性克隆,注射本氏烟(Nicotiana benthamiana)后发现,共同接种DNA-A和DNA-B的烟草叶片出现黄色褪绿斑点症状,而单独接种DNA-A或DNA-B的烟草中未出现任何症状。另外,我们对胜红蓟黄脉病毒福建烟草分离物F2(Ageratum yellow vein virus-F2, AYVV-F2)的DNA-A(登录号EF527823)及其伴随DNA-β(登录号EF527824)及本实验室保存的一个缺陷型DNA-β(ΔDNA,登录号FJ605171)进行了侵染性克隆的构建,以期对其致病机制进行初步探讨。注射烟草后发现,AYVV-F2 DNA-A+ DNA-β或者AYVV-F2 DNA-A+ΔDNA-β这两种组合都能引起本氏烟(Nicotiana benthamiana)及普通烟(Nicotiana tobacum)轻微的黄脉症状。

全文目录

摘要  8-10
Abstract  10-12
第一章研究背景  12-18
  1 双生病毒的分类  12-15
    1.1 玉米线条病毒属（Mastrevirus）  13
    1.2 甜菜曲顶病毒属（Curtovirus）  13
    1.3 番茄伪曲顶病毒属（Topocuvirus）  13
    1.4 菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）  13-15
  2 双生病毒伴随的类似 Nanovirus 的 DNA1 分子  15
  3 双生病毒伴随新型的卫星分子—DNA-β  15-16
  4 双生病毒的危害  16
  5 双生病毒侵染性克隆的构建及其应用  16-17
  6 立题依据  17-18
第二章实验材料与方法  18-24
  1 材料  18
    1.1 毒源  18
    1.2 菌株和质粒  18
    1.3 主要试剂  18
    1.4 常用缓冲液及抗生素的配制（见附录A）  18
  2 方法  18-24
    2.1 植物总DNA 提取（CTAB 法）  18-19
    2.2 PCR  19-20
    2.3 PCR 产物纯化  20
    2.4 DNA 克隆技术  20-22
    2.5 重组质粒转入农杆菌  22-23
    2.6 Southern 印迹检测  23
    2.7 DNA 序列测定及分析  23-24
第三章侵染野葛的双生病毒鉴定  24-34
  1 材料和方法  24-26
    1.1 毒源  24
    1.2 植物总DNA 的提取  24-25
    1.3 PCR 扩增、克隆和序列测定  25
    1.4 序列分析  25-26
  2 结果与分析  26-32
    2.1 病毒分离物的分子检测  26-27
    2.2 Yg3 是野葛花叶病毒的一个分离物  27-30
    2.3 Yg3 病毒基因组结构  30-32
  3 讨论  32-34
第四章野葛花叶病毒致病性研究  34-44
  1 材料与方法  34-37
    1.1 材料  34
    1.2 构建侵染性克隆所用引物（表4.1）  34-35
    1.3 侵染性克隆的构建（图4.1）  35
    1.4 侵染性克隆的转化  35
    1.5 农杆菌接种  35
    1.6 接种后 KuMV-Yg3 的 PCR 鉴定  35-36
    1.7 病毒DNA 的Southern 印迹检测  36-37
  2 实验结果  37-42
    2.1 KuMV-Yg3 病毒分离物 DNA-A 及 DNA-B 侵染性克隆的构建  37-40
    2.2 KuMV-Y93 DNA-A 及DNA-B 致病性测定  40-42
  3 讨论  42-44
第五章胜红蓟黄脉病毒及其伴随卫星分子致病性研究  44-57
  1 材料与方法  44-49
    1.1 材料  44
    1.2 构建侵染性克隆所用引物（表5.1）  44-45
    1.3 构建AYVV-F2 DNA-A、DNA-β及ΔDNA-β侵染性克隆（图5.1）  45
    1.4 侵染性克隆的转化  45
    1.5 农杆菌接种  45
    1.6 接种后AYVV-F2 DNA-A、DNA-β及ΔDNA-β的PCR 鉴定  45-49
  2 实验结果  49-55
    2.1 AYVV-F2 DNA-A、DNA-β及ΔDNA-β侵染性克隆的构建  49-53
    2.2 AYVV-F2 DNA-A、DNA-β及ΔDNA-β的致病性测定  53-55
  3 讨论  55-57
全文小结  57-59
参考文献  59-64
附录 A 常用缓冲液及培养基配方  64-67
附录 B 本文所用载体图谱  67-68
附录 C 本文所用核酸分子量标准 Lambda DNA-EcoR I+Hind III (A) 及 150bp DNA Ladder Marker (B)  68-69
附录 D 本文所用术语缩写及中英文对照  69-70
附录 E 硕士期间发表相关文章  70-71
致谢  71

福建省两种双生病毒的致病机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文