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几种糖苷化合物和人参果胶体外抗肿瘤活性的研究

作　者: 杨旭
导　师: 台桂花
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 甾体皂苷黄芩苷人参果胶体外抗肿瘤
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

植物光合作用的初生产物—糖类,是植物的贮藏养料和支持物质,也是许多天然化合物的前体。研究发现,一些植物多糖具有显著的生物学活性。糖苷化合物是糖类的衍生物。许多糖苷化合物尤其是甾体糖苷及其修饰产物,具有显著的药理活性,如抗肿瘤活性等。本论文对黄芩苷及其酯化产物进行体外抗肿瘤活性研究;探索了甾体糖苷solamargine、solasonine、chaconine和dioscin的体外协同抗肿瘤活性;并对人参果胶(一种植物多糖)的体外抗肿瘤活性进行了初步研究。第一部分对几种糖苷的体外抗肿瘤活性进行研究。采用四唑盐比色实验(MTT)分析黄芩苷及其酯化产物对小鼠成纤维细胞L929、人宫颈癌细胞Hela和人肝癌细胞H7402增殖的抑制作用。结果表明,黄芩苷正丁酯具有较好的抑制细胞增殖活性,其次是黄芩苷异丙酯,而黄芩苷苄酯无明显抑制活性。推测可能是黄芩苷中葡萄糖醛酸的6-位羧基酯化后产物极性发生了变化,水溶性降低,脂溶性增加,使得黄芩苷酯对于肿瘤细胞的亲和性增加,易于通过细胞膜进入到细胞内发挥作用。另外,黄芩苷及其酯化产物的抑瘤活性具有细胞选择性,对H7402、L929细胞均有较强的抑制活性,对Hela细胞则无明显抑制作用。采用MTT分析法研究了solamargine、solasonine、chaconine和dioscin四种甾体皂苷对L929、Hela和H7402细胞的协同抑制作用。结果显示,dioscin与另外三种甾体皂苷混用均表现出协同作用;solamargine单独作用时在本实验中的抑制活性虽然不高,但在分别与其他三种药品共同刺激H7402细胞时却表现出显著的协同作用;而chaconine虽然在单独作用时抑制作用很高,但未表现出普遍的协同作用。Chaconine、solamargine、dioscin的抑制活性具有明显的细胞选择性,对H7402、Hela细胞均有较强的抑制活性,对L929细胞无明显抑制作用。第二部分主要探讨人参果胶的体外抗肿瘤活性。以人宫颈癌细胞Hela、人纤维肉瘤细胞HT-1080、人结肠癌细胞HT-29、人胶质瘤细胞U251、人胶质瘤细胞U87作为受试细胞,用人参果胶处理72 h,并与三种标准多糖:普鲁兰(Pullulan)、阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan)、β(1-6)葡聚糖进行比较。用倒置显微镜观察细胞的生长状态及形态变化;用MTT法检测人参果胶对细胞增殖的影响,并计算细胞增殖抑制率;用吖啶橙/碘化丙啶(AO/ PI)双染和Hoechst 33342染色检查人参果胶对细胞凋亡的影响;用流式细胞术—碘化丙啶(PI)荧光单染法检测人参果胶对HT-29细胞周期的影响。结果显示,经人参果胶处理72h后,细胞形态发生了很大变化;人参果胶能抑制受试肿瘤细胞的增殖,但不能引起细胞调亡。进一步用流式细胞术检测到人参果胶对HT-29细胞在G2/M期有阻滞作用,其阻滞率为19%。最后,从细胞增殖与细胞周期阻滞的角度探讨了人参果胶抗肿瘤作用的机理。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
第一章综述  10-23
  1 糖苷类物质的研究进展  10-17
    1.1 糖苷生物碱的研究进展  10-13
    1.2 薯蓣属(Dioscorea)植物甾体皂苷的研究进展  13-15
    1.3 黄芩苷的研究进展  15-17
  2 多糖类物质的研究进展  17-20
    2.1 免疫调节作用  17
    2.2 肿瘤抑制作用  17-18
    2.3 治疗心血管系统疾病  18-19
    2.4 减小毒副作用  19
    2.5 其它  19-20
  3 抗肿瘤体外实验的方法  20-22
    3.1 细胞增殖的检测——MTT 法体外药敏试验  20
    3.2 细胞凋亡的检测  20-22
  4. 选题依据  22-23
第二章糖苷类物质抗肿瘤活性的研究  23-35
  1 实验材料  23-24
    1.1 仪器与试剂  23
    1.2 试剂的配制  23-24
    1.3 受试细胞  24
  2 实验方法  24-27
    2.1 细胞培养  24-25
    2.2 药物配比和稀释  25-26
    2.3 细胞悬液配制  26
    2.4 结果处理  26
    2.5 统计学处理  26-27
  3 结果与讨论  27-35
    3.1 黄芩苷及其酯化产物的抗肿瘤活性及构效关系的研究  27-29
    3.2 糖苷生物碱对抑制肿瘤细胞的协同作用  29-35
第三章多糖类物质抗肿瘤活性的研究  35-59
  1 实验材料  35-36
    1.1 受试细胞  35
    1.2 试剂与配制  35-36
    1.3 仪器与设备  36
  2 实验方法  36-40
    2.1 细胞培养  36-37
    2.2 MTT 法测定多糖对癌细胞增殖的影响  37-38
    2.3 细胞凋亡的检测  38-39
    2.4 流式细胞仪检测  39
    2.5 统计学处理  39-40
  3 实验结果  40-57
    3.1 倒置显微镜观察多糖处理癌细胞72 h 后的生长概况及形态变化结果  40-45
    3.2 MTT 比色实验结果及不同浓度多糖对癌细胞的抑制率  45-47
    3.3 台盼蓝染色结果  47
    3.4 AO/PI 荧光染色结果  47-53
    3.5 Hoechst 33342 荧光染色核的变化结果  53-57
    3.6 流式细胞术分析检测人参果胶对人结肠癌HT-29 细胞周期的影响  57
  4 讨论  57-59
结论  59-60
参考文献  60-65
致谢  65

几种糖苷化合物和人参果胶体外抗肿瘤活性的研究

内容摘要

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