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新工艺仙灵骨葆制剂抗实验性骨质疏松症的研究

作　者: 向春锦
导　师: 潘思源
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中药药理
关键词: 仙灵骨葆胶囊骨质疏松症骨密度骨生物力学骨组织形态计量学碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原氨基交联末端肽微量元素
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

仙灵骨葆是以淫羊藿、续断、补骨脂、地黄、丹参、知母组成的中药复方制剂,具有活血化淤、补肾壮骨的功效。临床主要用于预防和治疗骨质疏松症。本课题为“十一五”国家科技支撑计划项目:仙灵骨葆胶囊的二次开发（项目编号:2006BAI06A17-01）项下的主要药效学研究。本部分实验主要通过仙灵骨葆对大鼠骨质疏松症的防治作用的研究来阐明其药效和可能的作用机制,并对新、原工艺的药效进行比较,为更好的发挥仙灵骨葆治疗骨质疏松症的疗效奠定理论基础和实验依据,具有非常强的现实意义。第一部分新工艺仙灵骨葆对去卵巢致大鼠骨质疏松症的作用方法:（1）造模:采用3月龄雌性Wistar大鼠双侧卵巢切除建立骨质疏松症模型,以倍美力为阳性对照药物,考察仙灵骨葆新工艺和原工艺对卵巢切除骨质疏松大鼠的作用。（2）分组及给药:卵巢切除后2天,将卵巢切除大鼠随机分为8组:假手术组（sham）,模型组（OVX）,倍美力组（ESG）,原工艺仙灵骨葆低剂量组（X0.5）,原工艺仙灵骨葆中剂量组（X1）,新工艺仙灵骨葆低剂量组（NX0.5）,新工艺仙灵骨葆中剂量组（NX1）和新工艺仙灵骨葆高剂量组（NX2）。Sham和OVX组给予0.5%的CMC。X0.5、X1组给予原工艺仙灵骨葆,生药量分别为0.5、1 g·kg^-1·day^-1;NX0.5、NX1和NX2组给予新工艺仙灵骨葆,生药量为0.5、1、2 g·kg^-1·day^-1;ESG组的给药剂量为0.03 mg·kg^-1·day^-1。术后2天开始给药,每日灌胃一次,连续灌胃90天。（3）指标测定:末次给药24 h后,收集血样、左右侧胫骨、股骨和腰椎,子宫称重,计算子宫指数。采用DEXA法测定大鼠股骨远端和腰椎的BMD;取胫骨近端制成不脱钙骨切片进行骨组织形态计量学分析;采用三点弯曲试验测定大鼠股骨骨生物力学参数;采用股骨颈压力试验考察股骨颈的生物力学参数;采用全自动生化分析仪测定血清中Ca、P、Mg含量和AKP的活性;采用微粒子酶免疫分析法测定血清E₂含量;用酶联免疫吸附法测定NTX含量;称取左侧股骨干重和灰重,计算灰重与干重比值（灰重系数）;电感耦合等离子体质谱仪测定大鼠左侧股骨骨灰中Ca、P、Mg和Sr、Mn、Zn、Cu的含量。结果:（1）与Sham组比较,OVX组大鼠E₂水平和子宫指数显著降低;与OVX组比较,新、原工艺对子宫指数和E₂含量无明显影响;ESG组E₂水平和子宫指数则明显升高。（2）与Sham组比较,OVX组大鼠股骨远端BMD和股骨灰重系数明显降低,腰椎BMD变化不明显;与OVX组比较,仙灵骨葆新工艺和原工艺均能显著增加大鼠股骨远端BMD和股骨灰重系数,防止去卵巢引起的骨质疏松骨量丢失,NX1组对灰重系数的影响优于X1组;ESG组能明显增加股骨灰重系数。（3）与Sham组比较,OVX组骨形态计量学显示TBV%显著下降,TRS%、TFS%和MAR均明显升高,OSW和mAR无明显改变;与OVX组比较,仙灵骨葆新、原工艺均能显著增加TBV%,降低TFS%和MAR,而新工艺能显著降低TRS%;ESG组能明显增加TBV%,降低TRS%、TFS%和MAR。新工艺中剂量较原工艺中剂量MAR降低明显。（4）与Sham组比较,OVX组股骨颈最大载荷明显降低,股骨颈断裂载荷以及三点弯曲中的最大载荷和断裂载荷变化不明显;与OVX组比较,新工艺仙灵骨葆能显著增加股骨颈最大载荷。（5）与Sham组比较,OVX组血清中AKP活性和NTX含量明显升高;与OVX组比较,仙灵骨葆新、原工艺均能显著降低骨转换生化指标AKP、NTX;ESG组也能明显降低AKP和NTX。（6）与Sham组比较,OVX组大鼠血清中Ca含量下降明显,血清P和Mg含量无变化,骨灰中Ca、P、Mg和Sr、Mn、Zn、Cu含量显著下降;与OVX组比较,仙灵骨葆新、原工艺均能显著增加骨灰中Ca、P、Mg、Sr、Cu的含量,新工艺能明显增加骨灰中Zn、Mn的含量,新工艺对骨灰中Ca、P、Mg和Mn、Cu的沉积优于原工艺;ESG组能明显升高骨灰中Ca、P、Mg和Sr、Mn、Zn、Cu的含量。（7）新工艺仙灵骨葆的药效呈一定剂量依赖性。结论:新工艺仙灵骨葆能明显提高卵巢切除大鼠的骨量,改善骨组织微结构的退化,降低骨转换,增加骨矿中Ca、P、Mg和Sr、Mn、Zn、Cu的含量,且具有一定的剂量依赖性;新工艺对骨矿含量的增加和促进骨矿中Ca、P、Mg、Mn、Cu的沉积优于原工艺,在改善股骨颈生物力学性能、降低骨吸收和促进骨矿中Zn的沉积方面也有优于原工艺的趋势。仙灵骨葆对卵巢切除大鼠骨质疏松症的作用机制可能与抑制骨吸收及调节体内微量元素的含量相关。这些机制与雌激素类似,而仙灵骨葆对去卵巢大鼠子宫重量和E₂含量却没有明显影响,提示仙灵骨葆治疗骨质疏松具有优于雌激素的组织选择性。2.新工艺和原工艺仙灵骨葆对维甲酸致大鼠骨质疏松症的作用方法:（1）造模:采用3月龄雄性SD大鼠,通过维甲酸诱导建立骨质疏松症模型,以福善美为阳性对照药物,考察仙灵骨葆新工艺和原工艺对维甲酸诱导骨质疏松大鼠的作用。（2）分组及给药:将大鼠随机分为8组:正常组（Nomal）,模型组（Model）,福善美组（FSM）,原工艺仙灵骨葆低剂量组（X0.5）,原工艺仙灵骨葆中剂量组（X1）,新工艺仙灵骨葆低剂量组（NX0.5）,新工艺仙灵骨葆中剂量组（NX1）,新工艺仙灵骨葆高剂量组（NX2）。除Nomal组外,其余各组大鼠维甲酸灌胃(80 mg·kg^-1·day^-1)15天造成骨质疏松模型后,开始给药,每日灌胃一次,连续灌胃30天。Sham和Normal组给予0.5%的CMC,仙灵骨葆新、原工艺给药剂量同上,FSM组给药剂量为0.17 mg·kg^-1·day^-1。（3）指标测定:收集血样、左右侧胫骨、股骨和腰椎。采用DEXA法测定大鼠股骨、股骨颈、股骨远端和腰椎的BMD;取胫骨近端制成不脱钙骨切片进行骨组织形态计量学分析;采用股骨颈压力试验考察股骨颈的生物力学参数;采用紫外分光光度仪测定血清中AKP和StrACP活性。结果:（1）与Sham组比较,Model组大鼠股骨、股骨颈、股骨远端和腰椎BMD明显降低;与Model组比较,仙灵骨葆新工艺能显著增加股骨、股骨颈和股骨远端BMD;FSM组大鼠股骨、股骨颈、股骨远端和腰椎BMD明显增加。（2）与Sham组比较,Model组大鼠骨形态计量学显示TBV%下降明显,TRS%、TFS%、MAR、mAR和OSW均显著上升;与Model组比较,仙灵骨葆新工艺和原工艺均能明显增加TBV%,新工艺能明显降低TRS%、TFS%、MAR和mAR,且NX1组较X1组TRS%和TFS%降低明显;FSM组TBV%明显上升,mAR明显降低。（3）与Sham组比较,Model组股骨颈压力试验中最大载荷、能量吸收明显降低;与Model组比较,仙灵骨葆新、原工艺均能显著增加股骨颈最大载荷,新工艺能显著增加能量吸收;FSM组能明显增加股骨颈最大载荷和能量吸收。（4）与Sham组比较,Model组血清中骨转换生化指标AKP和StrACp显著上升,显示骨转换增加;与Model组比较,仙灵骨葆新、原工艺均能显著降低StrACp,且NX1组较X1组StrACp降低明显,新工艺能明显降低AKP;FSM组能明显降低AKP和StrACp。结论:仙灵骨葆新工艺能明显提高骨质疏松大鼠的骨量,改善骨组织微结构的退化,提高股骨颈的生物力学性能,降低骨吸收。新工艺在降低骨转换方面优于原工艺,且新工艺对骨密度的增加和抗股骨颈骨质疏松骨折能力也有优于原工艺的趋势。仙灵骨葆对卵巢切除大鼠骨质疏松症的作用机制可能与抑制破故细胞活性,降低骨吸收相关。

全文目录

目录  4-7
中文摘要  7-10
ABSTRACT  10-13
英文缩略语  13-14
综述一骨质疏松动物模型的复制与评价  14-18
  1 大鼠  14-15
  2 小鼠  15-16
  3 兔  16-17
  4 羊  17-18
综述二仙灵骨葆的研究进展  18-25
  1 实验研究  18-19
  2 临床研究  19-21
  参考文献  21-25
前言  25-27
第一部分新工艺仙灵骨葆制剂抗去卵巢致大鼠骨质疏松症的研究  27-55
  1 材料  27-28
    1.1 实验动物  27
    1.2 受试药物  27
    1.3 主要试剂  27
    1.4 主要仪器  27-28
  2 方法  28-34
    2.1 造模方法  28
    2.2 饲养环境  28
    2.3 动物分组及给药  28
    2.4 取材方法  28-29
    2.5 指标测定  29-34
    2.6 统计方法  34
  3 结果  34-49
    3.1 对去势大鼠子宫指数的影响  34-35
    3.2 对去势大鼠股骨远端、腰椎BMD的影响  35-36
    3.3 对去势大鼠胫骨近端骨小梁形态计量学的影响  36-39
    3.4 对去势大鼠胫骨近端骨皮质形态计量学的影响  39
    3.5 对去势大鼠股骨干生物力学性能的影响  39-40
    3.6 对去势大鼠股骨颈生物力学性能的影响  40
    3.7 对去势大鼠血清中Ca、P、Mg浓度的影响  40-41
    3.8 对去势大鼠血清中AKP活性和NTX含量的影响  41-43
    3.9 对去势大鼠血清雌激素E_2水平的影响  43
    3.10 对去势大鼠股骨灰重系数的影响  43-44
    3.11 对去势大鼠股骨中常量元素Ca、P、Mg含量的影响  44-46
    3.12 对去势大鼠股骨中微量元素Sr、Mn、Zn、Cu含量的影响  46-49
  4 讨论  49-54
    4.1 模型的选择和给药  49-50
    4.2 研究的骨骼位点  50
    4.3 对BMD和骨矿含量的影响  50
    4.4 对骨组织形态计量学的影响  50-51
    4.5 对骨生物力学性能的影响  51-52
    4.6 对骨转换生化指标的影响  52
    4.7 对Ca、P、Mg和Sr、Mn、Zn、Cu的调节作用  52-53
    4.8 阳性对照药物倍美力  53
    4.9 对雌激素E_2和子宫指数的影响  53-54
  5 小结  54-55
第二部分新工艺仙灵骨葆制剂抗维甲酸致大鼠骨质疏松症的研究  55-70
  1 材料  55
    1.1 实验动物  55
    1.2 受试药物  55
    1.3 主要试剂  55
    1.4 主要仪器  55
  2 方法  55-57
    2.1 造模方法  55
    2.2 动物分组及给药  55-56
    2.3 取材方法  56
    2.4 指标测定  56-57
    2.5 统计方法  57
  3 结果  57-67
    3.1 对模型大鼠股骨、股骨颈、股骨远端和腰椎BMD的影响  57-60
    3.2 对模型大鼠胫骨近端组织形态计量学的影响  60-63
    3.3 对模型大鼠股骨颈生物力学性能的影响  63-65
    3.4 对模型大鼠血清中AKP和StrACP活性的影响  65-67
  4 讨论  67-68
  5 小结  68-70
结语  70-71
参考文献  71-74
致谢  74-75
个人简历  75-76
附图一仙灵骨葆对去卵巢大鼠胫骨近端骨小梁的影响  76-77
附图二仙灵骨葆对维甲酸模型大鼠胫骨近端骨小梁的影响  77-78
附图三骨小梁上双标记线及类骨质  78

新工艺仙灵骨葆制剂抗实验性骨质疏松症的研究

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