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梗阻性黄疸患者肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1、claudin-4的表达及其意义

作　者: 于惠玲
导　师: 姜慧卿
学　校: 河北医科大学
专　业: 内科学
关键词: 梗阻性黄疸 肠黏膜损伤 内毒素血症 claudin-1 claudin-4
分类号: R575
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:梗阻性黄疸导致肠黏膜屏障功能损伤,从而产生一系列并发症,如败血症和肾功能衰竭等。引起梗阻性黄疸相关并发症的主要病理生理机制是因为肠屏障衰竭引起的肠源性内毒素血症。临床和实验研究显示梗阻性黄疸肠屏障损伤与肠黏膜通透性增加有关。肠黏膜通透性增加是梗阻性黄疸患者细菌和内毒素易位,从而导致败血症和肾功能衰竭的关键因素。但是,梗阻性黄疸肠黏膜通透性增加的分子机制尚未完全清楚。有研究表明梗阻性黄疸肠黏膜通透性增加可能与肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达变化有关。紧密连接位于上皮细胞和内皮细胞侧膜的顶端形成通透屏障,调控离子、大分子和细胞穿过旁细胞途径的通透性。它包括闭锁蛋白(occludin)、claudin蛋白、ZOs (zonula occludins)蛋白以及连接黏附分子(junction adhesion molecular, JAM)等。本实验通过光镜及电镜观察梗阻性黄疸患者肠黏膜形态学及超微结构的改变,采用分光光度法检测血清内毒素(endotoxin, ET)、二胺氧化酶(diamine oxidase, DAO)活性,免疫组织化学(SP)法检测紧密连接蛋白claudin-1、claudin-4在梗阻性黄疸患者肠黏膜的表达情况,进一步探讨梗阻性黄疸肠黏膜屏障功能损伤的机制。方法:收集2008年5月至2008年12月在河北医科大学第二医院消化科行ERCP检查或治疗的25例胆管梗阻患者,其中15例梗阻性黄疸患者作为梗阻性黄疸组,胆总管结石患者6例,壶腹周围癌患者9例;其中10例梗阻无黄疸患者作为梗阻无黄疸组,胆总管结石患者6例,壶腹周围癌患者4例。收集10例行胃镜检查的健康受检者作为正常对照组。3组患者均于行ERCP或胃镜检查当日取清晨空腹外周静脉血4 ml,采用分光光度法检测血清ET和DAO活性。在ERCP或胃镜检查时于十二指肠降部Vater’壶腹远端取活检,均钳取肠黏膜组织3块,其中1块以4%戊二醛固定,制备电镜标本,用透射电镜观察肠黏膜超微结构的改变。2块以10%甲醛固定,常规石蜡包埋,4μm切片,HE染色,光镜下观察肠黏膜的形态学改变进行肠黏膜损伤的病理学评分,并采用免疫组织化学(SP)法检测肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白claudin-1、claudin-4的表达情况。应用SPSS 10.0统计软件进行数据处理。结果:1.HE染色光镜下观察:正常对照组和梗阻无黄疸组患者肠黏膜绒毛完整,上皮细胞排列整齐;梗阻性黄疸组患者肠黏膜的绒毛完整性部分被破坏,表现为绒毛顶端上皮下间隙增大,上皮层与固有层分离,绒毛两侧也有分离伴部分绒毛顶端上皮层破损。梗阻性黄疸组患者肠黏膜损伤的病理学评分(2.60±0.51)明显高于正常对照组(0.40±0.52) (P<0.05)和梗阻无黄疸组(0.50±0.53) (P<0.05)。而正常对照组和梗阻无黄疸组患者相比无统计学差异(P>0.05)。2.透射电镜下观察:正常对照组和梗阻无黄疸组患者肠黏膜微绒毛排列整齐,连接复合体包括紧密连接完整,细胞连接紧密;梗阻性黄疸组患者肠黏膜微绒毛明显稀疏,连接复合体结构破坏,细胞连接增宽。3.血清ET、DAO活性测定结果:梗阻性黄疸组患者血清ET、DAO活性(0.15±0.02、4.25±0.64)均高于正常对照组(0.03±0.01、1.58±0.57) (P<0.05)和梗阻无黄疸组(0.03±0.01、1.71±0.88) (P<0.05);正常对照组与梗阻无黄疸组患者相比,血清ET、DAO活性均无统计学差异(P>0.05)。而且梗阻性黄疸患者血清ET水平与TB (r=0.856, P<0.05)和DAO ( r=0.697, P<0.05)水平分别呈正相关,血清DAO水平与TB水平呈正相关(r=0.752, P<0.05)。另外,梗阻性黄疸组中,胆总管结石患者与壶腹周围癌患者相比,血清ET、DAO活性均无统计学差异(P>0.05)。4.claudin-1和claudin-4免疫组织化学结果显示:3组患者肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1和claudin-4均分布于肠上皮细胞的细胞膜,为棕褐色的线状分布。梗阻性黄疸组患者肠黏膜claudin-1蛋白表达(16.22%±1.16%)低于正常对照组(23.44%±1.27%) (P<0.05)和梗阻无黄疸组(23.06%±0.90%) (P<0.05) ,而claudin-4蛋白表达(29.41%±1.36%)高于正常对照组(24.02%±1.21%) (P<0.05)和梗阻无黄疸组(24.39%±1.09%) (P<0.05)。正常对照组和梗阻无黄疸组患者相比,肠黏膜claudin-1和claudin-4蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。另外,梗阻性黄疸组中,胆总管结石患者与壶腹周围癌患者相比,肠黏膜claudin-1和claudin-4蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。结论:梗阻性黄疸患者存在一定程度的肠黏膜损伤,导致肠源性内毒素血症。梗阻性黄疸患者肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白claudin-1表达减少和claudin-4表达增加,可能与梗阻性黄疸肠黏膜屏障损伤的机制有关。

全文目录


中文摘要  4-8
英文摘要  8-14
研究论文 梗阻性黄疸患者肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1、claudin-4 的表达及其意义  14-50
  前言  14-15
  材料与方法  15-23
  结果  23-25
  附图  25-31
  附表  31-34
  讨论  34-43
  结论  43-44
  参考文献  44-50
综述  50-61
致谢  61-62
个人简历  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肝及胆疾病
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