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速眠新对大鼠、犬细胞色素酶P450表达的影响

作　者: 徐丽娜
导　师: 马玉忠
学　校: 河北农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 速眠新原代肝细胞 CYP3A1 CYP2E1 大鼠犬
分类号: S859
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

现阶段国内兽医临床上应用较多的麻醉药是速眠新,它属于神经安定镇痛剂,主要成分是双氢埃托啡、保定宁和氟哌啶醇。具有很好的镇静、镇痛和肌松作用,已广泛应用于各种动物的麻醉。麻醉药进入体内要进行生物转化,肝脏是生物转化的主要场所。药物在肝脏中的生物转化有赖于其微粒体中的多种酶系,其中最重要的是细胞色素P450混合功能氧化酶系统,其中的CYP3A和CYP2E1与麻醉药的代谢密切相关。目的:建立分离及培养原代大鼠和犬肝细胞的试验方法,并通过体外实验探讨麻醉药代谢的分子机理,为临床合理用药提供理论依据。方法:采用胶原酶二步灌流法灌注SD雄性大鼠肝脏,获取大鼠肝细胞,用含有多种辅助因子的Williams’E培养基进行培养,每天观察原代肝细胞的生长情况,并进行图像采集。并用不同浓度的速眠新及其主要成分保定宁处理大鼠肝细胞0.5-24h,Western Blot法检测肝细胞中CYP3A1和CYP2E1的表达。另外用不同浓度的速眠新、保定宁分别与地塞米松联合应用处理大鼠肝细胞0.5-24h,Western Blot法检测肝细胞中CYP3A1和CYP2E1的表达。还通过上述方法获取并培养犬的肝细胞,用不同浓度的速眠新、保定宁、氯胺酮处理犬肝细胞1-4h,及这三种药分别与地塞米松联合应用处理肝细胞1-4 h,用Western Blot法检测犬肝细胞中CYP450的表达。结果:每只大鼠可获得2-4×108个肝细胞,犬的肝细胞相对较多。它们的成活率都在95%左右,培养的肝细胞形态完整、生长良好,可用于药物代谢的研究。速眠新、保定宁对大鼠肝细胞CYP3A1和CYP2E1均具有诱导作用。在作用12h情况下,2%速眠新和0.4%保定宁是CYP3A1和CYP2E1表达的最佳剂量。速眠新、保定宁与地塞米松分别联用。在作用6h情况下,1%速眠新是CYP3A1和CYP2E1表达的最佳剂量。在作用12h情况下,0.02%保定宁是CYP3A1和CYP2E1表达的最佳剂量。不同浓度的速眠新对犬CYP450的诱导作用在2h时0.015%的浓度表达最明显。保定宁浓度为0.05%,作用2h时表达最明显。氯胺酮作用肝细胞2h,浓度为0.2%时表达最明显。氯胺酮与速眠新联合应用作用肝细胞2h,在浓度为0.025%时表达最明显。速眠新与地塞米松合用作用犬肝细胞2h浓度为0.004%时表达最明显。保定宁与地塞米松合用作用肝细胞2h,浓度为0.04%对CYP450的诱导作用最明显。氯胺酮与地塞米松合用作用肝细胞2h,浓度为0.04%时表达最明显。结论:通过胶原酶二步灌流法可获得大量大鼠和犬的肝细胞,而且存活率高,这为麻醉药的临床药理试验提供了很好的试验材料。通过Western Blot等方法,检测出了速眠新在不同情况下的最佳用药剂量,这为它的临床合理应用提供了依据。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1 引言  10-16
  1.1 兽用麻醉药的研究现状  10-12
  1.2 细胞色素P450 酶系  12-13
  1.3 药物代谢与P450 的关系  13-14
  1.4 孕烷受体及CYP3A 基因表达  14
  1.5 原代肝细胞培养  14-16
2 材料和方法  16-27
  2.1 试验材料  16-17
    2.1.1 试验动物  16
    2.1.2 主要试剂及药品  16
    2.1.3 主要仪器  16-17
  2.2 试验方法  17-27
    2.2.1 大鼠及犬肝细胞的分离及原代培养  17-19
    2.2.2 Western Blot 法检测速眠新、保定宁对大鼠肝细胞CYP3A1、CYP2E1 的影响  19-23
    2.2.3 速眠新、保定宁与地塞米松分别联合应用对大鼠肝细胞 CYP3A1、CYP2E1 表达的影响  23-24
    2.2.4 速眠新、保定宁、氯胺酮对犬肝细胞CYP450 的影响  24-25
    2.2.5 速眠新、保定宁、氯胺酮与地塞米松联合应用对犬肝细胞CYP450 表达的影响  25-27
3 结果  27-36
  3.1 大鼠肝细胞形态观察  27
  3.2 速眠新、保定宁对大鼠肝细胞CYP3A1、CYP2E1 表达的影响  27-30
    3.2.1 速眠新对CYP3A1 表达的影响  27-28
    3.2.2 速眠新对CYP2E1 表达的影响  28-29
    3.2.3 保定宁对CYP3A1 表达的影响  29
    3.2.4 保定宁对CYP2E1 表达的影响  29-30
  3.3 速眠新、保定宁与地塞米松联合应用对大鼠肝细胞CYP3A1、CYP2E1 表达的影响  30-32
    3.3.1 速眠新与地塞米松联合应用对大鼠肝细胞CYP3A1 的影响  30-31
    3.3.2 速眠新与地塞米松联合应用对大鼠肝细胞CYP2E1 的影响  31
    3.3.3 保定宁与地塞米松联合应用对大鼠肝细胞CYP3A1 的影响  31-32
    3.3.4 保定宁与地塞米松联合应用对大鼠肝细胞CYP2E1 的影响  32
  3.4 速眠新对原代培养的犬肝细胞CYP450 的影响  32-34
    3.4.1 犬原代肝细胞的形态观察  32
    3.4.2 速眠新对原代培养的犬肝细胞CYP450 的影响  32-33
    3.4.3 保定宁对原代培养的犬肝细胞CYP450 的影响  33
    3.4.4 氯胺酮对原代培养的犬肝细胞CYP450 的影响  33
    3.4.5 氯胺酮与速眠新合用对原代培养的犬肝细胞CYP450 的影响  33-34
  3.5 速眠新、保定宁、氯胺酮与地塞米松联合应用对犬肝细胞CYP450 表达的影响  34-36
    3.5.1 速眠新与地塞米松联合应用对犬肝细胞CYP450 表达的影响  34
    3.5.2 保定宁与地塞米松联合应用对犬肝细胞CYP450 表达的影响  34-35
    3.5.3 氯胺酮与地塞米松联合应用对犬肝细胞CYP450 表达的影响  35-36
4 讨论  36-41
  4.1 肝细胞的原代培养  36
  4.2 速眠新、保定宁对大鼠肝细胞CYP3A1、CYP2E1 表达的影响  36-37
  4.3 速眠新、保定宁与地塞米松分别联合应用对大鼠肝细胞 CYP3A1、 CYP2E1 表达的影响  37-39
  4.4 速眠新、保定宁、氯胺酮对犬肝细胞CYP450 的影响  39-40
  4.5 速眠新、保定宁、氯胺酮与地塞米松分别联合应用对犬肝细胞CYP450 表达的影响  40-41
5 结论  41-42
参考文献  42-48
附录  48-50
在读期间发表的学术论文  50-51
作者简历  51-52
致谢  52

速眠新对大鼠、犬细胞色素酶P450表达的影响

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