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晚期糖基化终产物对人正常肝细胞的毒性作用及功能的影响

作　者: 李海成
导　师: 刘誉
学　校: 暨南大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 人正常肝细胞晚期糖基化终产物细胞毒性原子力显微镜
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

【目的】研究晚期糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGEs)对人正常肝细胞株LO2的细胞毒性作用及功能的影响。【方法】1.以葡萄糖与牛血清白蛋白(BSA)等共同孵育制备成AGEs,用荧光分光光度计测定AGEs的含量。2.以体外培养的LO2细胞为研究对象,不同浓度AGEs处理LO2细胞24、48、72小时后,采用MTT法测定不同浓度不同时间AGEs对LO2生长的抑制作用;用荧光显微镜观察细胞的分裂次数;应用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况。3.用原子力显微镜观察不同浓度AGEs处理LO2细胞48小时后细胞表面形态的改变。4.测定不同浓度AGEs处理LO2细胞48小时后细胞裂解液中AST活力的改变。5.RT-PCR法分析不同浓度AGEs处理LO2细胞48小时后其IL-1β,TNF-α,HMGB1(high-mobility group box 1),PKLR(Pyruvate kinase of liver and RBC)的mRNA表达水平的变化。【结果】1.MTT结果显示,与对照组相比,AGEs能显著抑制LO2细胞的增殖,其抑制作用具有时间和剂量依赖性。2.流式细胞仪分析发现,AGEs能促使LO2细胞发生凋亡,且促凋亡作用具有时间和剂量依赖性。3.荧光显微镜观察发现,AGEs能抑制LO2细胞的分裂增殖。4.原子力显微镜观察发现AGEs作用LO2细胞48h后,细胞表面的平均粗糙度增加。5.酶活力测定结果发现AGEs作用LO2细胞后,AST的活性下降。6.RT-PCR方法检测显示,AGEs使LO2细胞IL-1β,TNF-α,HMGB1的mRNA表达水平增高,但使PKLR的mRNA表达减少。【结论】1.AGEs对LO2细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈现出良好的时效与量效关系。2.AGEs能促进LO2细胞的凋亡。3.AGEs对LO2细胞的毒性作用可能与上调IL-1β,TNF-α,HMGB1的mRNA水平有关。4.AGEs使LO2细胞表面平均粗糙度增加,对细胞膜的形态结构具有损害作用。5.AGEs使LO2细胞AST的活力下降,使PKLR的mRNA的表达下调。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-9
前言  9-17
第一章体外AGEs的制备和鉴定  17-20
  1.材料和方法  17-18
  2.实验结果  18-20
第二章 AGEs对LO2细胞增殖和凋亡的影响  20-30
  1.材料和方法  20-23
  2.实验结果  23-30
第三章 AGEs对LO2细胞表面形态的影响  30-34
  1.材料和方法  30-31
  2.实验结果  31-34
第四章 AGEs对LO2细胞IL-1β,TNF-α,HMGB1基因表达的影响  34-40
  1.材料和方法  34-38
  2.实验结果  38-40
第五章 AGEs对LO2细胞PKLR基因表达的影响及对AST活力的影响  40-46
  1.材料和方法  40-43
  2.实验结果  43-46
讨论  46-51
全文结论  51-52
参考文献  52-57
英文缩略词(Abbreviation)  57-59
在校期间发表文章  59-60
致谢  60

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