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人类β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因β3GnT8（GalT7）和β3GnT2在白血病细胞株中功能相关性初步探索

作　者: 孙斌
导　师: 吴士良；仇灏
学　校: 苏州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: β3GnT8(GalT7) β3GnT2 白血病
分类号: Q987
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)即β3GalT7是本实验室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶,通过同源序列比对确定其属于β3糖基转移酶大家族。有学者报道,β3GnT2和β3GnT8(GalT7)能够在体外形成异二聚体,此复合物的催化活性比两者各自的酶活性显著增强。本文旨在对不同白血病细胞株中β3GnT2和β3GnT8(GalT7)的表达变化,探究两者在白血病中的功能相关性。方法:1.采用RT-PCR技术,在8种白血病细胞株及24例白血病病人骨髓有核细胞中检测β3GnT8(GalT7)、β3GnT2, mRNA水平的表达,以10例正常成人骨髓有核细胞作相对正常对照。2.构建β3GnT8(GalT7)的RNA干扰真核表达载体并得到稳定的β3GnT8(GalT7)基因敲减细胞株。3.利用RT-PCR和Western blot分别分析细胞株转染前后β3GnT8(GalT7)、β3GnT2在mRNA水平和蛋白水平的表达变化。结果:1.β3GnT8(GalT7)在SHI-1、THP-1、HL-60、K562、NB4、U937细胞和18例初诊白血病病人骨髓标本中有不同程度的表达,在KG1,Raji细胞和相对正常对照中没有表达;β3GnT2在SHI-1、THP-1、HL-60、K562、NB4、U937、Raji细胞、4个相对正常对照和16例初诊白血病病人骨髓标本中有不同程度的表达,在KG1细胞中和6个相对正常对照中没有表达。2.成功构建β3GnT8(GalT7)的RNA干扰真核表达载体。3. RT-PCR和Western blot结果显示的β3GnT8(GalT7)和β3GnT2的mRNA和蛋白表达都随着β3GnT8(GalT7)的表达下降而抑制。结论:实验显示,β3GnT2和β3GnT8(GalT7)在不同白血病细胞株中有不同程度的表达,提示β3GnT8(GalT7)基因的过表达从而使β3GnT2活性大大增加最终导致恶变细胞中聚乙酰半乳糖胺增多,而促进其浸润转移。β3GnT8(GalT7)和β3GnT2在白血病甚至肿瘤的浸润、转移中的作用具有一定的相关性。

全文目录


中文摘要  5-6
Abstract  6-8
1 前言  8-15
第一部分 β3GnT8(GalT7)和β3GnT2 在不同白血病细胞株中的表达分析  15-23
  材料和方法  15-18
  结果  18-20
  讨论  20-21
  参考文献  21-23
第二部分 β3GnT8(GalT7)基因RNA 干扰表达载体的构建及其与β3GnT2 功能相关性的初步研究  23-38
  材料和方法  23-31
  结果  31-35
  讨论  35-37
  参考文献  37-38
小结  38-39
附录一 中英文缩略词表  39-41
附录二 硕士学习期间发表的论文  41-42
附录三 综述  42-50
致谢  50-51

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中图分类: > 生物科学 > 人类学 > 人类遗传学
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