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典型草原区大针茅（Stipa grandis）根系内生真菌的研究

作　者: 海丽丽
导　师: 韩冰；赵萌莉
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 放牧强度 内生真菌 大针茅 侵染 生长发育
分类号: S812
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 33次
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内容摘要


大针茅草原在我国典型草原区分布比较广泛,是占有面积较大的一类典型的禾草草原,又是内蒙古典型草原区的主体,该区的可利用范围大,主要利用方式是放牧牲畜。内生真菌广泛生活在禾本科植物体内,与寄主植物形成互惠共生的关系。本研究选择内蒙古典型草原生态系统中多年生优势植物大针茅(Stipa grandis)作为试验材料,研究不同放牧强度对其根系内丛枝菌根(AM)真菌侵染率的影响,并分离纯化大针茅根系的内生真菌进行分子鉴定,通过对无菌大针茅幼苗的再侵染,测定被侵染植株的生长势来评价内生真菌对大针茅生长发育的影响,得出以下主要结论:1.根据菌根侵染率调查,大针茅可以和AM真菌形成良好的共生关系。不同放牧强度下的AM真菌侵染率具有显著差异,总侵染率大小排列顺序为LG>CK>MG>HG,轻度放牧最有利于根系内生真菌的生长、定殖。2.利用组织分离法从大针茅根系中分离纯化得到17株内生真菌,根据菌落特征和分子生物学方法鉴定,H-1、H-6、H-9、H-10、H-14菌株属于子囊菌纲;H-7、H-8、H-11、H-16菌株属于镰刀菌属;H-12和H-17菌株属于爪哇正青霉属;H-2和H-3与内生真菌Embellisia sp.的序列同源性高达99%;H-13和H-15与引起植物炭疽病的microdochium bolleyi病原菌序列有99%的同源性;H-4是一种内生真菌,但未确定种属;H-5菌株属于微结节菌属。3.由于AM真菌不能得到纯培养,利用嵌套PCR技术扩增真菌的SSU序列,并利用特异引物鉴定出AM真菌属于球囊霉属。4.用分离出的内生真菌H-1、H-2、H-3、H-6、H-9、H-10以及根际土与根系的混合物作为AM真菌的接种剂分别对大针茅进行接种,与未做任何接种的对照组相比,除菌株H-2外,其它菌株接种处理后的大针茅的株高、叶片数、干鲜重都有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-10
1 引言  10-19
  1.1 大针茅植物简介  10
  1.2 放牧对草原的影响  10-13
    1.2.1 放牧对草地植物的影响  10-11
    1.2.2 放牧对土壤理化性质的影响  11-12
    1.2.3 放牧对 AM 真菌侵染的影响  12-13
  1.3 内生真菌的含义及其生物学特征  13
  1.4 内生真菌的生态学分类  13
  1.5 内生真菌的分布及多样性  13-14
  1.6 内生真菌对寄主植物的影响  14-17
    1.6.1 内生真菌促进植物生长发育  14-15
    1.6.2 内生真菌与植物抗旱性  15-16
    1.6.3 内生真菌与植物耐盐性  16
    1.6.4 内生真菌对植物病虫害的防治  16-17
  1.7 植物内生真菌的分离、鉴定研究方法  17-18
    1.7.1 植物内生真菌的分离培养  17-18
    1.7.2 植物内生真菌的鉴定  18
  1.8 本研究目的和意义  18-19
2 材料与方法  19-27
  2.1 研究地点概况  19
  2.2 试验材料采集和处理  19
  2.3 仪器和试剂  19-20
  2.4 试验方法  20-27
    2.4.1 菌根侵染率调查  20-21
    2.4.2 内生真菌的分离、纯化  21-22
    2.4.3 根系内生真菌的分子鉴定  22-27
    2.4.4 根系内生真菌对大针茅的侵染  27
3 结果与分析  27-43
  3.1 不同放牧强度对菌根侵染率的影响  27-31
    3.1.1 放牧对不同菌根结构侵染率的影响  27-29
    3.1.2 根系内生真菌形成的形态结构  29-30
    3.1.3 侵染交叉点数的统计分析  30-31
  3.2 根系内生真菌的分离、纯化培养  31-32
    3.2.1 根系内生真菌的分离结果  31
    3.2.2 根系内生真菌的培养性状  31-32
  3.3 根系内生真菌的分子鉴定  32-40
    3.3.1 DNA 的提取  32-33
    3.3.2 PCR 扩增  33-34
    3.3.3 目的片段的琼脂糖回收  34-35
    3.3.4 菌落PCR 检测  35-36
    3.3.5 目的片段生物信息学分析  36-40
  3.4 根系内生真菌对大针茅生长发育的影响  40-43
    3.4.1 根系内生真菌对株高、叶片数的影响  40-42
    3.4.2 根系内生真菌对大针茅干、鲜重的影响  42-43
4 讨论  43-45
  4.1 放牧对AM 真菌侵染的影响  43-44
  4.2 内生真菌的分离方法的局限性  44
  4.3 AM 真菌的 SSU 序列及嵌套PCR 技术  44-45
5 结论  45-47
致谢  47-48
参考文献  48-54
附录  54-56
作者简介  56

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 普通畜牧学 > 草地学、草原学
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