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金鱼Striatin基因对金鱼胚胎发育的调控功能分析

作　者: 彭云磊
导　师: 李万程
学　校: 湖南师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 金鱼 PP2A striatin 基因表达分子克隆胚胎发育显微注射表型缺失
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

蛋白磷酸酶-2A (PP2A),是真核生物体内最主要的一种蛋白磷酸酶,它是一个异源三聚体,包括支架蛋白A亚基、催化C亚基以及调节亚基B。目前的研究表明调节亚基B,由超过16个不同基因编码,因此,除了有调节PP2A活性的功能之外,很可能还有其它的功能。为了研究PP2A调节亚基在脊椎动物发育过程中充当怎样的角色,我们克隆了金鱼PR110/B’"家族调节亚基striatin以及SG2NA,并且我们在金鱼的组织及胚胎中分析了这两个基因的组织特异性及发育表达模式。我们的结果显示striatin基因全长cDNA包含2349个核苷酸,推测其编码782个氨基酸；SG2NAα基因包含一个2118 bp的开放阅读框,推测其编码705个氨基酸,其另外的一个变体SG2NAβ包含一个2148 bp的开放阅读框,推测其编码715个氨基酸。PR110/B"的这两个异构体与其它物种之间显示出很高的同源性。Striatin基因的功能,除了作为PP2A的调节亚基之外,其它的功能目前还不是很清楚。本研究为了进一步研究Striatin基因在低等脊椎动物中的功能,首先,我们从金鱼的脑中提取了RNA,并通过反转录得到了striatin cDNAs,再通过RT-PCR我们克隆了长约1000bp左右带酶切位点的基因片段。其次,使用反义RNA技术,前面得到的基因片段可以被反向的插入到pEGFP-C3载体(一种绿色荧光蛋白载体)中构成反义载体pEGFP-striatin-AS。最后,在金鱼胚胎lcell时期,将反义载体注入到胚胎的胚盘中。我们的结果显示：85%左右的绿色荧光胚胎在脊椎或尾部具有异常；通过对异常眼睛的石蜡切片,我们发现金鱼胚胎眼睛的晶状体有明显的纤维症状,以及晶状体与视网膜上皮之间的间隙相对正常眼睛来说变得更加狭窄。此外,异常胚胎的眼睛中视网膜上皮细胞呈现不规则状态及增厚的现象。从这些结果我们不难看出Striatin基因在金鱼胚胎发育的过程中起着重要的作用。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
前言  9-22
  1 蛋白磷酸酶2A(PP2A)  10-19
    1.1 PP2A的结构  11-12
    1.2 PP2A调节亚基B'"家族  12
    1.3 PP2A调节亚基B'"-Striatin蛋白家族概述  12-13
    1.4 Striatin蛋白质家族的结构特点  13-15
    1.5 Striatin蛋白家族的表达定位  15
    1.6 Striatin蛋白家族功能研究  15-19
  2 反义核酸  19-22
    2.1 反义核酸技术分类  19-20
    2.2 反义RNA技术作用机制  20-22
第一章 Striatin基因的克隆及正、反义载体的构建  22-36
  1 实验材料和方法  22-29
    1.1 实验材料  22-24
    1.2 实验方法  24-29
  2 实验结果  29-33
    2.1 Striatin基因的克隆  29-30
    2.2 正义载体pEGFP-Striatin的构建  30-32
    2.3 正义载体pEGFP-Striatin测序结果  32-33
    2.4 反义载体pEGFP-Striatin-AS的构建及测序结果  33
  3 讨论  33-36
    3.1 以绿色荧光蛋白作为蛋白标记的反义RNA技术  33-34
    3.2 新型的免疫荧光技术  34-36
第二章金鱼胚胎显微注射后表型变化及RNA水平上表达分析  36-43
  1 材料和方法  36-39
    1.1 实验材料  36
    1.2 实验方法  36-39
  2 实验结果  39-41
    2.1 金鱼胚胎显微注射结果  39
    2.2 金鱼胚胎显微注射结果分析  39-40
    2.3 金鱼畸形胚胎RNA水平上表达结果分析  40-41
  3 讨论  41-43
    3.1 反义RNA技术在干扰基因表达上的局限性  41
    3.2 核糖核酸干扰(RNAi)技术在基因干扰中的应用  41-43
第三章金鱼畸形胚胎眼睛的石蜡切片结果分析  43-50
  1 材料和方法  43-47
    1.1 材料  43
    1.2 实验方法  43-47
  2 实验结果  47-48
  3 讨论  48-50
参考文献  50-56
附录  56-57
致谢  57-58

金鱼Striatin基因对金鱼胚胎发育的调控功能分析

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