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小鼠种植前2细胞和4细胞胚胎的MicroRNA芯片分析

作　者: 崔骥
导　师: 童国庆
学　校: 南京医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: miRNA 小鼠种植前胚胎生长发育基因表达调控
分类号: R321
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

哺乳动物早期胚胎的发育和分化是一个复杂的过程,其调控机制是近年来研究的难点和热点问题之一。哺乳动物种植前胚胎在体外发育时往往会出现发育阻滞现象,发生的时期不尽相同。小鼠胚胎的体外阻滞发生在2细胞时期,即在离体培养条件下,小鼠受精卵经一次分裂后就停顿在2细胞期,不能继续分裂。尽管人们为寻找引起2细胞阻滞的原因做了多方面研究,但阻滞现象的分子机制至今依然知之甚少。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是近年来发现的一类长约19-25个核苷酸的单链非编码RNA分子,在从线虫到人类的真核生物中广泛存在。miRNA已被证实在发育早期通过下调mRNA的转录控制基因表达。大量研究表明,miRNA在小鼠种植前胚胎中有表达,并且在小鼠2细胞期时明显表达下降,提示在胚胎基因组激活的过程中发挥着重要的功能。但是,到4细胞期时miRNA的表达量又有所上升,这种在胚胎2细胞期后miRNA表达量的再次改变造成的后果尚不清楚,对胚胎发育的影响也尚不明确。而小鼠胚胎发育阻滞正发生在2细胞期,我们推测miRNA在这一时期的表达变化可能与胚胎发育阻滞密切相关。因此,本课题拟开展miRNA在小鼠2细胞和4细胞胚胎中表达的研究,以期找到miRNA对种植前胚胎生长发育等方面可能起作用的依据。目的:建立小鼠的超排、交配和胚胎收集系统,研究miRNA在小鼠2细胞和4细胞胚胎中的表达情况,探讨miRNA在种植前胚胎发育中的作用和意义。方法和结果:1、应用miRNA扩增结合miRNA芯片技术,筛选在小鼠受精后1.5天(2细胞)和2.5天(4细胞)胚胎中差异表达的microRNA。通过MicroRNA芯片数据的分析,筛选发现共有192个(>2倍)表达有显著差异的miRNA。其中,122个miRNA在4细胞时表达比2细胞明显上调,70个miRNA在4细胞时表达比2细胞明显下调。2.采用荧光定量RT-PCR方法验证mmu-miR-467h、mmu-miR-466d-3p、mmu-miR-292-5p、mmu-miR-154、mmu-miR-2145和mmu-miR-706在小鼠2细胞和4细胞胚胎中的表达水平,结果发现这6个miRNA的表达水平与芯片结果相符,提示与小鼠早期胚胎的生长发育可能相关。结论:通过成功建立小鼠的超排、交配和胚胎收集系统,应用miRNA芯片技术,筛选发现了在小鼠种植前2细胞和4细胞胚胎中差异表达的microRNA。这是在小鼠胚胎基因组激活之后,miRNA的表达发生的又一次变化,通过对这些差异表达的miRNA的表达水平及功能进行分析,提示miRNA可能通过调控在胚胎发育中的某些重要的与发育有关的基因的表达,对胚胎发育起重要作用,对深入了解胚胎发育阻滞的分子机制具有重要意义。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-14
材料与方法  14-26
结果  26-41
讨论  41-46
小结  46-47
参考文献  47-52
缩略语表  52-53
附录  53-54
致谢  54

小鼠种植前2细胞和4细胞胚胎的MicroRNA芯片分析

内容摘要

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