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目的:糖尿病性脂肪肝（Diabetic Fatty Liver, DFL）是指在糖尿病（Diabetes Mellitus, DM）基础上出现的肝细胞的脂肪变性,临床上可将其归属于非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic Fatty Liver Disease, NAFLD）的范畴。“二次打击”学说认为在NAFLD发生过程中,胰岛素抵抗（Insulin Resistance, IR）和脂代谢紊乱是第一次打击,导致肝脏对多种损伤因素敏感;氧化应激、脂质过氧化及各种损伤因子是第二次打击,导致肝脏进一步发生变性、炎症、坏死及纤维化。二次打击在DFL的发病过程中表现得尤为突出。本研究通过对SD大鼠采用高脂饮食联合腹腔注射中剂量链脲佐菌素（Streptozotocin, STZ）的方法建立DFL模型,应用益气养阴化痰通络中药复方对该模型进行干预,通过观察实验动物一般情况、肝指数、肝脏病理形态学、血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）的含量、肝组织丙二醛（MDA）水平、肝组织总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、血清脂联素水平,肝组织脂联素（Adiponectin）及其受体2（Adiponectin Receptor2, AdiR2）水平,探讨益气养阴化痰通络中药复方对DFL的治疗作用及其可能的作用机制,为临床上治疗以气阴两虚痰瘀阻络为基本病因病机的消渴提供实验依据。方法:清洁级健康雄性SD大鼠75只,体重240260g,适应性饲养1周后,按体重随机分为正常组12只、模型组18只、益气养阴化痰通络中药低剂量组、中剂量组、高剂量组每组各15只。除正常组给予普通饲料喂养外,其余各组大鼠均给予高脂饲料喂养。喂养4周后,除正常组外,其余各组大鼠一次性腹腔注射STZ 35mg·kg-1,正常组腹腔注射相当剂量枸橼酸缓冲液,72小时后连续3次尾静脉取血测血糖,以≥16.7mmol·L-1为DM模型造模成功标准。造模成功后,益气养阴化痰通络中药低、中、高剂量组大鼠分别给予中药5.29g·kg-1·d-1、10.58g·kg-1·d-1、21.16g·kg-1·d-1灌胃,正常组及模型组给予相当剂量的生理盐水灌胃,每日一次,共8周。于用药后第8周末,禁食12h,麻醉状态下称量体重,股动脉取血,分离血清,测定TG、TC、HDL,ELISA方法检测血清Adiponectin水平;摘取肝脏,称量肝脏重量计算肝指数,留取肝组织置于4%多聚甲醛固定液,光镜下观察各组大鼠肝脏病理形态学变化;留取肝组织液氮速冻后置-80℃低温冰箱保存,用于检测肝组织中MDA含量、T-SOD活力, RT-PCR方法检测肝脏组织中Adiponectin含量,Western blot方法检测肝脏AdiR2的表达。结果:1实验大鼠的一般状况实验过程中除正常组外,其余四组均有死亡情况,其中模型组死亡4只,中药高剂量组死亡2只,中、低剂量组死亡各1只,死亡原因可能与高血糖引起的酮症酸中毒及各脏器功能紊乱有关。正常组大鼠体重呈进行性增长,饮食正常,反应敏捷,眼光有神,毛发有光泽,粪便呈麦粒样,尿量正常。其余各造模组大鼠腹腔注射STZ后,出现明显的多饮多尿现象,并逐渐出现精神萎靡,反应迟钝,眼光呆滞,毛发无光泽,粪便时而不成形。2各组大鼠体重、肝重、肝指数（肝湿重/体重×100%）结果显示:各组大鼠体重与肝湿重,与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组大鼠体重、肝湿重明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组体重、肝湿重明显降低（P<0.05）;各中药治疗组之间无显著性差异（P>0.05）;各组大鼠肝指数,与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组大鼠肝指数明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组肝指数明显降低（P<0.05）;各中药治疗组之间无显著性差异（P>0.05）。提示,益气养阴化痰通络中药可明显降低DFL大鼠体重、肝湿重及肝指数,减轻肝脏的脂肪变性。3各组大鼠肝脏病理形态学改变正常组大鼠肝小叶完整,界限清晰,肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列,其中央有大而圆的细胞核,细胞质均匀,偶可见小脂滴,肝窦清晰可见,肝索排列整齐;模型组大鼠肝小叶界限不清,肝细胞脂肪变性肿胀,肝细胞内含有大小不等的脂肪滴,将肝细胞核挤向一侧,肝窦间隙明显变窄,局部可见纤维组织增生,延伸向肝小叶内部,肝索排列紊乱;益气养阴化痰通络中药各治疗组肝小叶结构清晰,肝窦轻度扩张,结构较正常,部分肝细胞脂肪变性,肝细胞内脂肪滴较模型组明显减少,多以小脂滴存在,肝索排列较整齐。提示,益气养阴化痰通络中药可改善DFL大鼠肝脏脂肪变性。4各组大鼠血清TG、TC、HDL含量各组大鼠血清TG含量结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组大鼠血清TG明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组血清TG明显降低（P<0.05）;中剂量组与高、低剂量相比明显降低（P<0.05）,中药高剂量组和低剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。各组大鼠血清TC含量结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组大鼠血清TC明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中药各组血清TC明显降低（P<0.05）;中药各组间比较,中剂量组与高、低剂量相比明显降低（P<0.05）,中药高剂量组和低剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。各组大鼠血清HDL含量结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组大鼠血清HDL明显降低（P<0.05）;与模型组相比,中药各组血清HDL明显升高（P<0.05）;中药各组间比较,中剂量组与高、低剂量相比明显升高（P<0.05）,中药高剂量组和低剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。以上结果提示,益气养阴化痰通络中药可明显降低DFL大鼠血清TG、TC含量,升高血清HDL含量,此可能为其治疗DFL的机制之一。5各组大鼠肝脏组织MDA含量及T-SOD活力各组大鼠肝组织MDA含量结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组明显降低（P<0.05）;中药各组间比较,高剂量组与低、中剂量相比明显升高（P<0.05）,中药低剂量组和中剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。各组大鼠肝组织T-SOD活力结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组明显降低（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组明显升高（P<0.05）;中药各剂量组之间比较,高剂量组与低、中剂量相比明显降低（P<0.05）,中药低剂量组和中剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。提示,益气养阴化痰通络中药可明显降低DFL大鼠肝脏组织中MDA含量并且提高T-SOD活力,明显改善DFL大鼠肝脏抗氧化能力,此可能为其治疗DFL的机制之一。6各组大鼠血清Adiponectin、肝组织Adiponectin及AdiR2的水平各组大鼠血清Adiponectin水平比较,结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组明显降低（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组明显升高（P<0.05）;中药各组间比较,高剂量组与低、中剂量相比明显降低（P<0.05）,中药低剂量组和中剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。大鼠肝脏Adiponectin水平比较,正常组、模型组及中药各治疗组之间无显著性差异（P>0.05）。各组大鼠肝组织AdiR2水平比较,结果显示:与正常组相比,模型组、中药低、中、高剂量组明显降低（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组明显升高（P<0.05）;中药各组间比较,中剂量组较高、低剂量明显升高（P<0.05）,中药高剂量组和低剂量组之间无显著性差异（P>0.05）。以上结果显示,益气养阴化痰通络中药可明显提高DFL大鼠血清Adiponectin水平和肝脏AdiR2水平,但对肝脏Adiponectin的水平影响不明显,提示本方对DFL的治疗作用可能与提高DFL大鼠血清Adiponectin水平和肝脏AdiR2水平有关,而与其对肝脏Adiponectin水平的影响无关。结论:1益气养阴化痰通络中药可明显改善DFL大鼠肝脏脂肪变性,降低肝指数,对于DFL有良好的治疗作用。2益气养阴化痰通络中药可明显降低DFL大鼠的血清TG及TC,升高血清HDL含量,提示其对DFL的治疗作用与调节血脂有关。3益气养阴化痰通络中药可明显提高DFL大鼠肝脏抗氧化能力,延缓“二次打击”学说中的第二次打击,即脂质过氧化,起到防止肝脏进一步变性、坏死及纤维化的作用,此可能为本中药复方治疗DFL的作用机制之一。4益气养阴化痰通络中药可明显升高DFL大鼠血清Adiponectin水平及肝脏AdiR2的水平,提示此作用可能为本中药复方治疗DFL的作用机制之一,而与其对肝脏Adiponectin水平的影响无关。
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