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木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白膜的体外实验研究

作　者: 左起亮
导　师: 姚江武
学　校: 福建医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 木瓜蛋白酶 β-酪蛋白消散因子石英晶体微天平 Botlzmann方程接触角原子力显微镜
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 31次
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内容摘要

目的:采用消散因子石英晶体微天平（QCM-D）体外原位、实时和动态监测β-酪蛋白（β-CN）生物膜在Au石英晶体表面的组装形成过程和木瓜蛋白酶水解β-CN生物膜的动力学过程,比较不同酶浓度的水解效率。采用接触角测量仪（CAM）考察β-CN生物膜经酶水解前后表面性状的变化,通过原子力显微镜（AFM）观察β-CN生物膜经酶水解前后表面形貌和粗糙度的变化。方法:QCM-D监测β-CN吸附于自组装膜上造成的频率（?F）、生物膜质量（m）、和厚度（h）变化。根据Langmuir（L）和Freundlich（F）吸附等温线的相关系数（R2）判断β-CN在自组装单层膜上的吸附行为。QCM-D上建立体外β-CN生物膜模型,采用不同浓度的木瓜蛋白酶水解蛋白膜,观察?F以及m、h的改变,运用Boltzmann S形方程对实验数据进行拟合,单因素方差分析和SNK-q检验比较水解参数B、Δm、Δh、V50、C和1/C。采用CAM和AFM分别考察纯Au（a）、包被11-MUA（b）、激活羧基（c）、固定有β-CN（d）以及分别经0.5μg/ml（e）和12.5μg/ml（f）的木瓜蛋白酶水解芯片表面的β-CN后接触角的变化和芯片表面形貌和粗糙度变化。配对t检验比较F和L吸附等温线的相关系数,单因素方差分析和SNK-q检验比较成膜参数?F、Δm、Δh,水解参数B、Δm、Δh、V₅₀、C和1/C,接触角测量值以及均方粗糙度之间的统计学差异。检验水平α= 0.05。结果:在临界胶束浓度内,随着β-CN浓度升高,膜的质量和厚度增加（P <0.05）,L吸附等温线能够更好的描述β-CN在SAM上的吸附行为。随着酶浓度增大,膜的厚度Δh减薄,ΔF上升增多,水解参数B增大,C减小,V50缩短（P <0.05）。接触角大小为c > b > d > e > f > a（P <0.05）。芯片表面的β-CN颗粒经酶水解后减少甚至消失,均方粗糙度大小为d > e > f > c（P <0.05）。结论:在临界胶束浓度内,β-CN在SAM上形成的膜为单层膜。在本实验浓度范围内水解蛋白生物膜时,酶的水解效率随浓度增大而提高。β-CN分子上的木瓜蛋白酶作用靶点位点位于肽链的疏水C端。高浓度的木瓜蛋白酶可均匀水解β-CN膜。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
前言  6-12
材料和方法  12-17
  实验仪器  12
  实验试剂  12-13
  实验方法  13-17
实验结果  17-25
讨论  25-37
结论  37-39
参考文献  39-44
致谢  44-46
综述  46-53
  参考文献  50-53

木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白膜的体外实验研究

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