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脂肪来源的干细胞移植对脑缺血大鼠神经轴突再生机制的研究

作　者: 陈爱珍
导　师: 刘楠
学　校: 福建医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 脂肪来源的干细胞脑梗塞神经轴突神经胶质酸性蛋白神经蛋白聚糖神经突蛋白神经微丝蛋白-200
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨脂肪来源的干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)移植对脑缺血大鼠神经轴突再生影响的机制,通过观察ADSC移植对脑缺血大鼠脑组织中Neurocan(神经蛋白聚糖)、GFAP(神经胶质酸性蛋白)、Neuritin(神经突蛋白)、NF200(神经微丝蛋白200)表达情况,为ADSC移植治疗脑缺血性疾病及其机理提供实验依据。方法:1、体外分离培养ADSC,免疫荧光检测其表面标志。2、实验动物分组:54只清洁SD大鼠随机分为假手术组(Sham组),局灶性脑缺血组(MCAO组)和MCAO +ADSC治疗组(ADSC组)。每组再分7d、14d、28d三个亚组,每个亚组6只。3、参考改良Zea-Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血模型。4、DAPI(4’,6-diamidino-2-phenylindole 2hci)体外标记ADSC。5、ADSC移植:ADSC组于造模成功1d后经侧脑室注射入ADSC(内含1×106细胞数)。6、各组大鼠在移植前后不同时间点进行神经功能mNSS评分。7、取材与检测7.1术后7d、14d、28d大鼠大脑灌注、取材、切片。7.2荧光显微镜观察DAPI标记的ADSC在体内存活情况。7.3 Western blot法检测GFAP、Neurocan、Neuritin、NF-200蛋白表达情况。7.4免疫荧光法观察GFAP、Neurocan、Neuritin、NF-200抗原表达情况。7.5 H-E染色法观察病理结果。8、统计学分析结果:1、ADSC组梗死灶周围的纹状体及额顶皮质下脑组织中可观察到DAPI标记的的阳性细胞。2、ADSC移植后能够减轻大鼠神经功能损害程度。3、H-E染色法结果显示梗死灶神经细胞大片坏死,周边区胶质细胞大量增殖,胶质瘢痕形成。4、Western blot法分析结果显示ADSC组脑缺血周边区组织在各个时间点与MCAO组相比GFAP、Neurocan表达明显减少,Neuritin、NF-200表达明显增高,差别具有统计学意义(P <0.05)。结论:ADSC移植后可引起脑缺血Neuritin、NF-200有效表达,并抑制GFAP阳性细胞、Neurocan表达,促进了神经轴突再生和修复。

脂肪来源的干细胞移植对脑缺血大鼠神经轴突再生机制的研究

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