学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

亲和层析技术的研究及应用

作　者: 王桂珍
导　师: 李任强
学　校: 暨南大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 亲和层析血红素抗氧化蛋白猪瘟病毒猪瘟抗体
分类号: Q503
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 352次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

亲和层析是蛋白质纯化的一种重要的方法,具有很高的选择性、分离效果以及较大的载量。往往只需要一步处理即可使某种待分离的蛋白质从复杂的蛋白质混合物中分离出来,达到千倍以上的纯化,并保持较高的活性。亲和层析的核心元件是亲和配基,配基被固定到亲水的固相介质上,通过特异性识别与目标蛋白结合达到纯化蛋白的作用。用环氧氯丙烷活化法把血红素结合于惰性分子筛填料Sephadex G-25上作为配基做成亲和层析柱,用于从白果或大豆中提取具有抗氧化活性的蛋白。此层析柱以去离子水为平衡液、0.2 mol/L的NaAc-HAc缓冲液(pH 3.6)为洗脱液,层析得到的蛋白质经亚油酸—硫氰酸钾抗氧化活性测定证明具有较高的抗氧化活性。白果全蛋白的抗氧化活性为7.92%,经此方法提纯后得到二种抗氧化多肽,活性达到17.45%；而大豆中的抗氧化蛋白经亲和纯化则得到多种,抗氧化活性由全蛋白时的10.52%提高至30.72%。这是一个新的、只需一个步骤即可从白果或大豆蛋白提取液中提取到具有高抗氧化活性蛋白的方法,具有成本低,快速高效的特点。接种猪瘟病毒于PK-15细胞中培养并收获,将纯化的猪瘟病毒偶联在用环氧氯丙烷活化的Sepharose-4B上作为配基,制备免疫亲和层析柱,从高免疫的猪血清中纯化抗体,快速制备猪瘟抗体,并通过SDS-PAGE和ELISA进行检测鉴定。所得抗体纯度高,活性强,特异性好。抗体的得率为猪血清总蛋白的2.45%。本研究提供了一个成本低、快速且有效的从高免疫的猪血清中制备猪瘟抗体的方法。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-8
第一章绪论  8-24
  1.1 亲和层析技术  8-23
    1.1.1 亲和层析技术原理  8-9
    1.1.2 亲和层析介质的制备  9-13
    1.1.3 亲和配基  13-15
    1.1.4 亲和柱的再生和保存  15
    1.1.5 亲和层析的基本操作  15-17
    1.1.6 亲和层析的应用  17-21
    1.1.7 亲和层析技术的发展  21-23
  1.2 本研究的内容、目的和意义  23-24
第二章亲和层析快速提取白果和大豆的抗氧化蛋白  24-35
  2.1 前言  24
  2.2 材料与方法  24-29
    2.2.1 实验材料  24-25
    2.2.2 实验仪器  25-26
    2.2.3 试剂的配制  26-27
    2.2.4 实验方法  27-29
  2.3 结果与讨论  29-33
    2.3.1 层析柱的分离作用  29-30
    2.3.2 SDS-PAGE结果  30-31
    2.3.3 目标蛋白与血红素反应的结果  31-32
    2.3.4 目标蛋白的抗氧化活性  32-33
    2.3.5 白果和大豆中抗氧化蛋白分析  33
  2.4 结论  33-35
第三章免疫亲和层析从猪血清中快速制备猪瘟抗体  35-42
  3.1 前言  35
  3.2. 材料和方法  35-38
    3.2.1 材料与试剂  35-36
    3.2.2 实验仪器  36
    3.2.3 试剂的配制  36-37
    3.2.4 实验方法  37-38
  3.3. 结果  38-40
    3.3.1 免疫亲和层析柱的分离作用  38-39
    3.3.2 抗体的纯度  39-40
    3.3.3 抗体的活性与提取率  40
  3.4 讨论  40-42
第四章总结与展望  42-44
参考文献  44-49
攻读硕士期间发表的论文  49-50
致谢  50

亲和层析技术的研究及应用

内容摘要

全文目录

相似论文