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胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运蛋白1承载区的功能分析

作　者: 周靓
导　师: 韩文瑜
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物学
关键词: 胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运蛋白黏附重组蛋白
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 71次
引　用: 1次
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内容摘要

本研究利用生物信息学技术,对APP自转运蛋白Aad1 C末端进行序列比对和结构预测,应用DNA重组方法,构建分泌型表达系统,利用免疫印迹技术,鉴定Aad1蛋白C末端在外膜中的表达情况,进一步证明其C末端结构特征,从而确定该未知蛋白属于哪个蛋白质家族。结果表明Aad1蛋白C末端序列与YadA和Hia的转运区域相比,序列上具有较高的同源性,预测的结构上具有一定的相似性;在SDS变性条件下,目的蛋白的分子量大小约是预期的3倍,说明Aad1蛋白C末端可以在细胞外膜表面形成稳定的三聚体结构,进一步证明Aad1蛋白是三聚体自转运蛋白家族成员。为下一步研究其承载区域的黏附活性分析提供基础。将APP三聚体自转运蛋白Aad1承载区域654-3255序列分为五段。利用生物学方法,将五个基因片段克隆入原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达、纯化,最终获得五个可溶性的重组蛋白,命名为GST- Aad1-2、GST- Aad1-3、GST- Aad1-4、GST- Aad1-5、GST- Aad1-6。应用免疫荧光技术和黏附抑制试验,对重组蛋白进行功能验证,比较Aad1各段重组蛋白对猪肺上皮细胞的黏附能力。结果表明,GST- Aad1-2、GST- Aad1-4和GST- Aad1-3,即位于N端654~1157、1703~2018区域和1295~1567区域,可以介导APP对猪肺上皮细胞的黏附作用,且GST- Aad1-2和GST- Aad1-4黏附能力高于GST- Aad1-3。由此推测,位于N端654~1157、1703~2018和1295~1567氨基酸残基区域可能是三聚体自转运黏附素蛋白Aad1的功能区,为揭示APP三聚体自转运蛋白分子致病机理提供重要的实验依据。

全文目录

内容提要  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-12
前言  12-14
第一篇文献综述  14-30
  第1章三聚体自转运蛋白的研究进展  14-25
    1.1 三聚体自转运蛋白的结构  14-16
    1.2 三聚体自转运蛋白的转运机制  16
    1.3 三聚体自转运蛋白的生物学研究  16-23
    1.4 展望  23-25
  第2章胸膜肺炎放线杆菌相关毒力因子的研究进展  25-30
    2.1 APP 定植于上呼吸道和扁桃体的相关因子  25
    2.2 APP 定植于下呼吸道的相关因子  25-27
    2.3 促进APP 诱导病变有关的毒力因子  27
    2.4 APP 避免宿主清除的毒力因子  27-28
    2.5 促进APP 持续存在有关的毒力因子  28
    2.6 结语  28-30
第二篇研究内容  30-66
  第1章胸膜肺炎放线杆菌血清5 型菌株L20 自转运蛋白C 末端的结构分析  30-43
    1.1 材料与方法  30-37
    1.2 结果  37-41
    1.3 讨论  41-42
    1.4 小结  42-43
  第2章胸膜肺炎放线杆菌血清5 型菌株L20 自转运蛋白的基因分段表达及纯化  43-58
    2.1 材料与方法  43-49
    2.2 结果  49-56
    2.3 讨论  56-57
    2.4 小结  57-58
  第3章胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运蛋白承载区的功能分析  58-66
    3.1 材料与方法  58-61
    3.2 结果  61-63
    3.3 讨论  63-65
    3.4 小结  65-66
结论  66-67
参考文献  67-76
攻读硕士期间发表的学术论文及其他成果  76-77
致谢  77-78
导师简介  78-79
作者简介  79

胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运蛋白1承载区的功能分析

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