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小麦储藏蛋白基因Avenin-like b启动子的克隆及表达载体构建

作　者: 王菲菲
导　师: 何光源
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物医学工程
关键词: 小麦 avenin-like b基因启动子反向PCR法启动子缺失分析表达载体
分类号: S512.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

小麦avenin-like b是最近发现的一类胚乳特异性表达蛋白质,被称为小麦“低分子量麦醇蛋白”,这类蛋白质富含有半胱氨酸残基,可以形成分子间或者分子内的二硫键,通过这种二硫键的作用形成蛋白质聚合体。因此,推测这类蛋白在小麦的加工品质中有可能起着很重要的作用。本实验室已经分离获得了多个小麦avenin-like b基因,并对其表达特性进行了研究。本研究在此基础上,分离得到了avenin-like b基因的上游启动子序列,并成功的构建了5种avenin-like b启动子驱动的gus基因表达载体,为应用遗传转化的方法分析该启动子表达特性奠定了基础。主要研究结果如下:1)采用反向的PCR技术,获得了avenin-like b基因上游的启动子全长序列1664 bp。2)通过应用PLACE和plantCARE等数据库分析分离的启动子元件,结果发现,该启动子除了具备启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box等,还含有胚乳特异性表达的元件如:GCN4、TGTAAAG、Skn1-motif、AACA等。3)为了分析鉴定上述启动子元件的作用,分别构建了启动子全长(1664 bp)的表达载体pALP17及5,端缺失的不同长度启动子(1000 bp、800 bp、600 bp、300 bp)的表达载体。小麦胚乳特异性启动子的分离和功能鉴定有助于深入研究种子的发育机制以及储藏蛋白基因的表达调控机制,分离并鉴定出具有高效的胚乳特异性表达的启动子也可以应用于驱动目的基因在小麦胚乳中表达,最终改良小麦的加工品质。因此,本研究不仅具有重要的理论意义而且具有潜在的应用价值。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-23
  1.1 植物启动子的结构与分类  8-17
  1.2 胚乳特异性启动子的研究  17-19
  1.3 启动子的分离方法  19-20
  1.4 avenin-like b 基因  20-21
  1.5 本研究的目的和意义  21-22
  1.6 研究的技术路线  22-23
2 小麦avenin-like b 基因启动子的分离与生物信息学分析  23-41
  2.1 实验材料  23-27
  2.2 实验方法  27-32
  2.3 结果与分析  32-39
  2.4 小结与讨论  39-41
3 avenin-like b 基因启动子载体的构建  41-59
  3.1 实验材料  41-42
  3.2 实验方法  42-50
  3.3 结果与分析  50-57
  3.4 小结与讨论  57-59
4 总结和展望  59-60
  4.1 总结  59
  4.2 有待继续开展的工作  59-60
致谢  60-61
参考文献  61-67
附录1 反向PCR 分离的avenin-like b 启动子全长序列  67-68

小麦储藏蛋白基因Avenin-like b启动子的克隆及表达载体构建

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