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恶性血液病合并侵袭性真菌感染的分子生物学鉴定及药物敏感性研究

作　者: 安晓庆
导　师: 周永安
学　校: 山西医科大学
专　业: 内科学
关键词: 真菌感染聚合酶链式反应限制性内切酶片段长度多态性耐药性
分类号: R519
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:1.鉴于恶性血液病真菌感染日趋严重,探讨恶性血液病合并真菌感染的分子生物学诊断方法,以达到对真菌感染的早期诊断的目的。2.随着抗真菌药物的广泛使用,耐药菌株逐渐增多,对菌株进行药敏实验,检测对常用抗真菌药物的敏感性。方法:1.采取患者静脉血进行常规血液培养;对血培养阳性样本进行菌株鉴定,并鉴定到种;使用改良的真菌DNA提取法进行基因提取;使用通用引物ITS1和ITS4进行基因扩增;使用MspI酶对扩增产物进行酶切鉴定;对扩增产物进行测序,所得序列与Genbank核酸库已登录的序列进行BLAST比对。2.使用ATBFUNGUS3试条进行药敏试验。抗真菌药物:两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)和伏立康唑(VRC)。结果:1.在500人份可疑真菌感染的全血标本中,共检出阳性样本115份。酶切鉴定结果为白色念珠菌48株(41.7%),热带念珠菌27株(23.5%),光滑念珠菌16株(13.9%)、克柔念珠菌11株(9.6%)、近平滑念珠菌8株(7.0%)、其他5株(4.3%)。与血培养分离鉴定结果基本一致。2.扩增产物经序列比对后发现,与酶切结果完全一致。PCR-RFLP检测和鉴定结果与血培养法有较好的一致性,但是统计学上无意义(p>0.05)。3.真菌主要为白色念珠菌,占41.7%。体外抗真菌药敏试验对两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)和伏立康唑(VRC)平均敏感率分别100%、97.22%、68.50%、77.78%和81.48%。其中对两性霉素B、5-氟胞嘧啶敏感性最好,耐药率分别为0%和2.78%。对氟康唑的敏感性最差,耐药率为31.50%。结论:1.使用PCR-RFLP进行菌株鉴定的技术敏感性、特异性高,与常规血培养方法比较耗时短,可以对真菌感染进行早期的诊断,有一定的临床意义。2.真菌感染主要由白色念珠菌、热带念珠菌引起。感染菌株对两性霉素B,5-氟胞嘧啶保持较高的体外活性,两者是治疗真菌的有效药物。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-8
主要缩略词  8-9
前言  9-11
材料和方法  11-14
方法  14-18
结果  18-23
讨论  23-26
结论  26-30
综述恶性血液病合并侵袭性真菌感染诊断与治疗的进展  30-37
  参考文献  35-37
个人简介及发表论文  37-38
致谢  38

恶性血液病合并侵袭性真菌感染的分子生物学鉴定及药物敏感性研究

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