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APS患者血清对HUVEC粘附分子表达的影响及氟伐他汀干预作用

作　者: 皮兴涛
导　师: 郝斌
学　校: 山西医科大学
专　业: 血管外科
关键词: 抗磷脂综合征人脐静脉内皮细胞氟伐他汀细胞间粘附分子-l E-选择素、血管内皮细胞粘附分子-1
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨抗磷脂综合征(APS)患者血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间粘附分子-1(ICAM-I)、E选择素(E-selectin)、血管内皮细胞粘附分子(VCAM-1)表达的影响及氟伐他汀的干预作用与机制。方法：采用酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过Ⅷ因子免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。选择生长良好的第3-4代细胞用于实验。分为(1)空白对照组：1640培养基；(2)APS浓度组：不同浓度的APS患者血清(10%、25%、50%、100%)培养细胞24h；(3)氟伐他汀浓度组：浓度为50%的APS患者血清加不同浓度氟伐他汀(2.5、5和10μmol/L)培养细胞24小时。甲羟戊酸组：浓度为50%的APS患者血清加不同浓度氟伐他汀(2.5、5和10μmol/L)和0.2mmol/L的甲羟戊酸培养HUVEC 24小时。各培养瓶中的细胞,经药物干预后收集细胞及培养上清液,采用RT-PCR技术测定细胞中的ICAM-I、E-selectin、VCAM-1 mRNA水平表达,抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测上清液中水平, Western-blot免疫印迹法检测各组细胞NF-κΒp65含量。结果：1.正常细胞生长良好,呈扁平多角形,边界清楚,胞质丰富,核圆形或椭圆形,随细胞密度增加呈现“铺路石样”排列；免疫荧光法证实内皮细胞特异Ⅷ因子相关抗原表达阳性。2.不同浓度的APS患者血清培养人脐静脉内皮细胞后,培养上清中(ICAM-I)、E-selectin、VCAM-1浓度及ICAM-I、E-selectin、VCAM-1 mRNA明显高于空白对照组,并呈浓度依赖性(P<0.05)。3.加入不同浓度的氟伐他汀干预,培养上清中的ICAM-I、E-selectin、VCAM-1浓度、细胞中ICAM-I、E-selectin、VCAM-1mRNA水平呈浓度依赖性下降,NF-kB p65含量变化趋势与各粘附分子浓度变化趋势一致(P<0.05)。4.加入甲羟戊酸后培养上清中的ICAM-I、E-selectin、VCAM-1浓度、细胞中ICAM-I、E-selectin、VCAM-1 mRNA水平、NF-kB p65含量与50%APS患者血清组无明显差异。结论：1.APS患者血清可以诱导HUVEC表达ICAM-I、E-selectin及VCAM-1。2.氟伐他汀可以抑制APS患者血清诱导的ICAM-I、E-selectin、VCAM-1表达增加,发挥抑制血栓形成,保护血管内皮的降脂外作用。3.氟伐他汀抑制APS患者血清诱导HUVEC表达ICAM-I、E-selectin、VCAM-1的作用可能是通过NF-kB途径实现的。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-8
英文缩略语表  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-20
结果  20-28
讨论  28-31
结论  31-32
参考文献  32-35
综述1  35-42
  正文  35-39
  参考文献  39-42
综述2  42-48
  正文  42-45
  参考文献  45-48
个人简介  48-49
致谢  49

APS患者血清对HUVEC粘附分子表达的影响及氟伐他汀干预作用

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