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南疆地区奶牛乳房炎性乳房链球菌遗传多样性分析

作　者: 王丽君
导　师: 张利莉；陈伟
学　校: 塔里木大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 乳房链球菌 脉冲场凝胶电泳 多位点序列分型 遗传多样性分析
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


乳房链球菌(Streptococcus uberis)是一种易引起奶牛隐性乳房炎的环境性病原菌,因其感染奶牛乳房后的难治愈性,给奶牛养殖户造成了重大的经济损失。本研究采用LMT(Lanzhou Mastitis Test,兰州乳房炎诊断液)试剂对来自新疆南疆地区3个集约化奶牛场的259份乳样进行隐性乳房炎检测,从阳性乳样中分离细菌。通过形态学和分子生物学鉴定相结合的方法进行乳房链球菌的分离鉴定,采用脉冲场凝胶电泳技术(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型技术(Multilocus Sequence Typing,MLST)相结合的方法对试验菌株进行遗传多样性分析。结果表明,检测乳样中有169份乳样为阳性,占65.3%。对该阳性乳样进行链球菌的分离鉴定,共获得链球菌42株,经16S rDNA基因克隆测序后最终确定乳房链球菌28株、猪链球菌(Streptococcus suis)9株、巴黎链球菌(Streptococcus lutetiensis)2株、Streptococcus waiu 1株和马链球菌(Streptococcus equinus)2株;对13株分离自1号奶牛场的乳房链球菌进行PFGE分析,结果表明该13株乳房链球菌的基因组均能被Apa I和Sma I两种限制性内切酶切开。酶切电泳条带在15 kb-276 kb之间,经Apa I单酶切后得到14个电泳条带,经Sma I单酶切后得到13个电泳条带,经Apa I和Sma I双酶切后得到19个电泳条带。酶切图谱表明13株乳房链球菌属于同一PFGE克隆型。对3个奶牛场分离的28株乳房链球菌的6个候选基因进行MLST分析,结果表明每个候选基因都具有3-5种不同的等位基因值(Allele Values)。再对这些等位基因值进行MLST分析,结果表明1号奶牛场的乳房链球菌只有1种序列型(Sequence Type, ST):ST158;2号奶牛场所分离的10株乳房链球菌分为5种序列型:ST154(10%)、ST155(50%)、ST156(10%)、ST157(20%)和ST159(10%);3号奶牛场的乳房链球菌有2种序列型:ST22和ST153,其中ST22占80%,ST153占20%。本研究结果揭示了引起南疆地区奶牛隐性乳房炎的乳房链球菌具有遗传多样性。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-8
前言  8-10
第一章 文献综述  10-18
  1 奶牛乳房炎的危害  10
  2 奶牛乳房炎病原菌的分类  10-11
  3 乳房链球菌的研究进展  11-13
  4 乳房链球菌的遗传多样性分析  13-15
    4.1 PFGE 分析  13-14
    4.2 MLST 分析  14-15
  5 本实验目的和意义  15-16
  6 论文的设计思路  16-17
  技术路线  17-18
第二章 南疆地区奶牛隐性乳房炎性链球菌的分离与鉴定  18-31
  1 材料  19-20
    1.1 实验材料  19
    1.2 主要仪器  19
    1.3 培养基  19-20
    1.4 主要试剂  20
  2 方法  20-26
    2.1 乳样的采集  20
    2.2 隐性乳房炎的检测  20-21
    2.3 细菌的分离培养  21
    2.4 链球菌的分离培养与纯化  21
    2.5 链球菌的分子生物学鉴定  21-26
  3 结果与分析  26-29
    3.1 隐性乳房炎的检测  26
    3.2 链球菌的分离  26-27
    3.3 分子生物学鉴定  27-29
  4 讨论  29-31
第三章 南疆地区奶牛隐性乳房炎性乳房链球菌遗传多样性分析  31-51
  1 材料和方法  32-36
    1.1 实验菌株  32-33
    1.2 主要仪器设备  33
    1.3 主要试剂  33
    1.4 乳房链球菌基因分型分析  33-36
  2 结果与分析  36-47
    2.1 PFGE 基因分型  36-39
    2.2 MLST 基因分型  39-47
  3 讨论  47-51
    3.1 PFGE 基因分型  47-48
    3.2 MLST 基因分型  48-51
第四章 结论  51-52
参考文献  52-57
致谢  57-58
作者简介  58-59
附录  59-61

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 牛
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