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黑青斑河豚NKEF过氧化氢酶活性的发现及其分子机制的探讨

作　者: 赵晶
导　师: 邵健忠; 项黎新
学　校: 浙江大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 鲁米诺 点突变
分类号: Q55
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


Natural killer enhancing factor(NKEF)最早由Shau等人于1993年在人红细胞质中分离得到，并由于其能增强NK细胞的细胞毒效应而被命名，是一种广泛存在于各物种间的蛋白质。近年来，NKEF在许多物种中被发现，并被证明是一种广泛存在于原核和真核生物中的蛋白，其氨基酸序列高度保守。在人当中，除NKEF外，还发现了一种与其高度同源的基因，因此两者被分别命名为NKEF-A，NKEF-B。研究者还发现NKEF在被氧化时可以形成同二聚体，通过Trx/TrxR系统利用NADPH提供的还原力，将二聚体重新还原为单体后，NKEF可再次与氧化剂反应，从而发挥其抗氧化功能，并由此将其命名为PrxI/II。本文通过比较NKEF单体和二聚体与H2O2的反应，发现单体和二聚体均可在不依赖Trx/TrxR还原系统的条件下单独发挥其抗氧化活性，这是对现有NKEF抗氧化机理的一个有益补充。本文利用鲁米诺化学发光法精确测定了NKEF的Km，Vmax和kcat等酶动力学参数，并利用PCR引入点突变的方法构建了一系列NKEF突变体，通过测定和比较各突变体间的相对活性，初步揭示NKEF发挥其过氧化氢酶样活性的关键位点及分子机制。

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中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 酶
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