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实验性心肌损伤大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ变化的比较研究

作　者: 王凤娟
导　师: 潘珊珊
学　校: 上海体育学院
专　业: 运动人体科学
关键词: 心肌肌钙蛋白Ⅰ 心肌损伤运动预适应力竭运动异丙肾上腺素大鼠
分类号: G804.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究目的：心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)作为一种检测心肌损伤的高特异性、高敏感性标志物之一,在检测运动性心肌损伤中有其独特的优势。苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)不仅可显示组织的基本形态结构,也可显示心肌细胞缺血缺氧的形态学改变。苏木素-碱性复红-苦味酸染色(hematoxylin basic fuchsin picric acid staining,HBFP染色)是一种检测早期心肌缺血缺氧的形态学指标。目前,应用上述三种研究方法已有许多研究报道,但血清cTnI与HBFP染色的相关性研究未见有报道,HE染色与HBFP染色的比较研究也未见有报道。因此,本研究分别采用大强度间歇运动诱导心肌预适应、力竭运动致运动性心肌损伤、异丙肾上腺素致药物性心肌损伤的方法,通过检测大鼠血清cTnI含量的变化,结合大鼠心肌组织HE染色和HBFP染色的形态学变化特征,对不同程度的实验性心肌损伤进行比较研究。探讨血清cTnI与心肌缺血缺氧损伤形态学的关系,为运动性心肌损伤和保护作用的研究提供更新的理论和实验依据。研究方法：采用健康雄性SD大鼠60只,随机分为对照组(control group,C组),运动预适应组(exercise preconditioning group,EP组),力竭运动组(exhaustive exercise group,EE组)和异丙肾上腺素组(isoprenaline group,ISO组)。C组常规饲养,不做任何处理；EP组用大强度间歇运动诱导心肌预适应；EE组用一次力竭运动致运动性心肌损伤；ISO组腹腔注射大剂量ISO致药物性心肌损伤。用免疫化学发光法检测血清cTnI的含量,用HE和HBFP染色观察心肌组织缺血缺氧的变化,用计算机图像分析技术对HBFP染色的缺血缺氧面积和积分光密度进行定量分析,并对各组血清cTnI含量与HBFP染色缺血缺氧面积进行相关性分析。所有数据以均数±标准差表示,组间比较用One-way ANOVA检验,相关性分析用CORRELATE检验,以P<0.05为差异有统计学意义。研究结果：1.血清cTnI含量检测：C组为0.0243±0.015 ug/L, EP组为0.0533±0.032 ug/L,EE组为46.08±37.41 ug/L,ISO组为35.7471±26.0ug/L,与C组比较,EP组含量略微升高,但不具有差异性；EE组明显升高,差异具有显著性(P<0.05)；ISO组也明显升高,差异具有显著性(P<0.05)；EE组和ISO组大鼠血清cTnI的含量不具有显著性差异。2.HE染色：C组和EP组心肌细胞胞质成分着红色,细胞排列整齐规则,染色均匀,轮廓清晰,分支互连成网,细胞核着蓝色,呈长卵圆形,位于细胞中央位置；EE和ISO两组肌纤维排列紊乱,部分呈波浪状,细胞境界欠清晰,部分细胞肿胀,胞浆红色不均匀,局部有嗜酸性红染增强。3.HBFP染色：C组和EP组的心肌细胞染色呈黄褐色,心肌细胞结构正常,肌丝排列规则,轮廓清晰,未见红色缺血缺氧染色。EE组和ISO组的胞浆被染成黄褐色,部分胞浆呈鲜红色,为缺血缺氧损伤区域,鲜红色呈斑点状或片状分布,以心内膜下、乳头肌、室间隔处较明显。4.HBFP染色图像分析：C组没有出现缺血缺氧染色,EP组出现几个红点状缺血缺氧染色,与C组比较,EP组缺血缺氧面积及积分光密度含量略微升高,但不具有显著性差异,EE组缺血缺氧面积为1865.5±1129.9μm2,积分光密度为475710±288121,ISO组缺血缺氧面积为1373.6±767.0μm2,积分光密度为350270±195587,与C组比较,EE组与ISO组的缺血缺氧面积及积分光密度明显升高,具有显著性差异(P<0.05)；而EE组和ISO两组间心肌组织HBFP染色缺血缺氧面积和积分光密度不具有显著性差异；5.血清cTnI含量与HBFP染色缺血缺氧面积相关性分析：血清cTnI含量与HBFP染色缺血缺氧面积的改变呈正相关。EP组大鼠血清cTnI含量与HBFP染色面积之间的相关系数为r=0.801(P<0.05)；EE组大鼠血清cTnI含量与HBFP染色面积之间的相关系数为r=0.805(P<0.05)；ISO组大鼠血清cTnI含量与HBFP染色面积之间的相关系数为r=0.890(P<0.05)。6.HE染色和HBFP染色显示心肌缺血缺氧改变的比较：采用相邻切片分别做HE染色和HBFP染色结果表明,当心肌细胞损伤时,HE染色心肌细胞嗜酸性增强部位与HBFP染色显示的心肌细胞缺血缺氧红染改变一致。研究结论：1.cTnI作为心肌损伤的标志物之一,可用于检测力竭运动和ISO所致的心肌损伤,一次大强度间歇跑台运动未造成心肌损伤；2.心肌细胞损伤后,血清cTnI含量与HBFP染色缺血缺氧面积的改变呈正相关；3.HE染色显示的心肌细胞嗜酸性增强与HBFP染色显示的心肌细胞缺血缺氧改变一致,两种染色方法联合使用,可综合观察心肌细胞缺血缺氧的变化。

全文目录

摘要  5-7
AbstraCt  7-12
1 前言  12-14
2 材料与方法  14-20
  2.1 实验技术路线  14-15
  2.2 主要试剂  15-16
  2.3 主要仪器与设备  16
  2.4 实验对象与方法  16-20
    2.4.1 实验对象和实验条件  16
    2.4.2 实验大鼠分组  16-17
    2.4.3 大强度间歇跑台运动诱导心肌预适应  17
    2.4.4 力竭运动致运动性心肌损伤  17
    2.4.5 异丙肾上腺素致药物性心肌损伤  17
    2.4.6 取材和灌注固定  17-18
    2.4.7 血清肌钙蛋白Ⅰ含量的测定  18
    2.4.8 石蜡切片的制备  18
    2.4.9 心肌组织HBFP染色  18-19
    2.4.10 心肌组织HBFP染色图像分析  19
    2.4.11 心肌组织HE染色  19-20
    2.4.12 统计学处理  20
3 研究结果  20-29
  3.1 血清肌钙蛋白Ⅰ含量的测定  20-21
  3.2 心肌组织HE染色观察  21
  3.3 心肌组织HBFP染色观察  21-24
  3.4 心肌组织HBFP染色图像分析  24-26
    3.4.1 心肌HBFP染色缺血缺氧面积变化  24-25
    3.4.2 心肌HBFP染色缺血缺氧区域积分光密度值变化  25-26
  3.5 血清cTnI含量与HBFP染色缺血缺氧面积相关分析  26-28
  3.6 HE染色和HBFP染色显示心肌缺血缺氧改变的比较  28-29
4 分析与讨论  29-32
  4.1 血清cTnI与心肌损伤  29-30
  4.2 血清cTnI与HBFP染色相关分析  30
  4.3 HE染色和HBFP染色比较  30-31
  4.4 血清cTnI作为心肌损伤标志物的应用前景  31-32
5 结论  32-33
6 参考文献  33-35
文献综述  35-43
致谢  43-44

实验性心肌损伤大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ变化的比较研究

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