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大蒜素联合奥沙利铂对Hela细胞增殖和凋亡的影响

作　者: 孙静
导　师: 谢建华
学　校: 宁波大学
专　业: 外科学
关键词: 大蒜素奥沙利铂宫颈肿瘤协同作用机制
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景:随着新辅助化疗在临床治疗中的广泛应用,宫颈癌患者的总体生存率有所提高,但传统化疗药具有一系列的毒副作用,寻求新的安全有效的化疗药物成为当今研究的热点,中药以其副反应小为特点,近年来国内外研究表明大蒜素可增强化疗药的抗肿瘤作用,并能减低化疗药的副反应,但对其作用机制尚未明确。目的:本实验通过研究大蒜素联合奥沙利铂对人宫颈癌细胞株Hela增殖和凋亡的影响,探讨大蒜素可否增强奥沙利铂对肿瘤细胞的杀伤作用;进一步探讨大蒜素与奥沙利铂联合应用的作用机制,为临床应用提供理论依据。方法:采用细胞培养技术进行人宫颈癌细胞株Hela细胞的培养,不同浓度大蒜素、奥沙利铂及两者联合作用于人宫颈癌Hela细胞后,用CCK法检测肿瘤细胞增殖抑制率;通过原位末端标记技术法(TUNEL)和AnnexinV-TITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞的凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果:CCK法发现奥沙利铂在4~64μmol/L浓度范围内在体外对Hela细胞的生长增殖有明显的抑制作用,且呈时间剂量依赖性,24h、48h和72hIC50分别为62.4μmol/L、30.2μmol/L和18.6μmol/L,联合大蒜素后抑制作用增强(p<0.05),24h、48h和72hIC50值分别由原来降至40.6μmol/L、18.7μmol/L和10.8μmol/L,细胞杀伤率分别提高1.60、1.61和1.72倍;流式细胞术显示IC50(48h)奥沙利铂作用Hela细胞48小时可以诱导部分Hela细胞凋亡,细胞凋亡率为22.7+3.4%,联合大蒜素后凋亡率增加(p<0.05),为50.5+5.7%。RT-PCR法检测结果显示大蒜素联合奥沙利铂作用Hela细胞后凋亡相关基因bcl-2mRNA表达水平下调,而bax和caspase-3 mRNA的表达水平上调,与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。结论:奥沙利铂可使Hela细胞生长受到明显的抑制;与大蒜素联合应用可增强其对肿瘤细胞的细胞毒活性,减少化疗药的用量,增强化疗敏感性,两者有协同抗肿瘤作用;其诱导Hela细胞凋亡的机制可能与下调bcl-2 mRNA和上调bax和caspase-3 mRNA有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-14
1 材料和仪器  14-16
  1.1 材料  14-15
    1.1.1 细胞系  14
    1.1.2 试剂与药品  14-15
  1.2 仪器和设备  15-16
2 实验方法  16-24
  2.1 细胞培养  16
  2.2 CCK（Cell Counting Kit，细胞检测试剂盒）法检测细胞生长抑制率及药物IC50  16-18
    2.2.1 CCK 原理  16
    2.2.2 CCK 法操作步骤  16-17
    2.2.3 用回归方程求出奥沙利铂及联合大蒜素后的半数抑制浓度（IC50）  17-18
  2.3 脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TDT 酶）介导的原位缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick and labeling，TUNEL）检测细胞凋亡  18-19
    2.3.1 TUNEL 原理  18-19
    2.3.2 TUNEL 步骤  19
  2.4 AnnexinV-FITC/PI 双染法检测凋亡  19-21
    2.4.1 AnnexinV-FITC/PI 双染法原理  19-20
    2.4.2 AnnexinV-FITC/PI 双染法实验步骤  20-21
  2.5 RT-PCR（reverse transcriptase polymerase chain reaction，逆转录聚合酶链式反应)检测bcl-2、bax 和caspase-3 mRNA 表达的变化  21-23
    2.5.1 RT-PCR 检测原理  21
    2.5.2 RT-PCR 实验步骤  21-23
  2.6 统计学处理  23-24
3 结果  24-30
  3.1 倒置显微镜下观察用药前后细胞形态的变化  24
  3.2 CCK-8 法检测细胞生长抑制率及药物IC50  24-26
  3.3 TUNEL 法检测细胞凋亡  26
  3.4 AnnexinV-FITC/PI 双染法检测凋亡  26-28
  3.5 RT-PCR 检测bcl-2、bax 和caspase-3mRNA 表达的变化  28-30
4 讨论  30-34
5 结论  34-35
参考文献  35-38
附录A 英文缩略词  38-39
在学研究成果  39-40
致谢  40-41
综述  41-45
  参考文献  44-45

大蒜素联合奥沙利铂对Hela细胞增殖和凋亡的影响

内容摘要

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