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基于核酸适体的腺苷检测新方法及应用研究

作　者: 张锦泉
导　师: 王永生
学　校: 南华大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 腺苷核酸适体金纳米粒子共振光散射 G-四联体荧光共振能量转移适体结构开关
分类号: R115
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

腺苷是一种内源性核苷,能参与血管神经舒张活动,具有抗心律失常的功效。因其在中枢神经和周围神经系统信号表达中的重要作用,腺苷受到广泛关注。另外,大量的研究表明,实体瘤细胞因其快速生长导致缺氧和坏死,导致腺嘌呤核苷酸降解释放大量腺苷。释放的腺苷又为肿瘤的快速生长提供了环境,从而导致更高浓度的腺苷在实体瘤中蓄积。尿中的腺苷水平反映了机体中腺嘌呤核苷酸的降解水平。一些研究证实了腺苷作为肿瘤的潜在生物标志物的重要意义,尿腺苷还被用来检测疾病的病程。此外,在生理状态下直接监测腺苷波动在心、脑生理功能的研究中扮演着不可忽视的角色。目前已建立的腺苷检测方法大多数存在仪器设备昂贵、操作费时且需要复杂的样本前处理等缺陷,因此建立腺苷检测新方法有着重要的现实意义。本文第二章基于腺苷与其适体特异性识别和腺苷适体偶联金纳米粒子自组装导致共振光散射信号放大建立了腺苷检测新方法。研究表明:在磷酸缓冲溶液中,腺苷与腺苷适体特异性结合,打开适体-DNA双链体结构开关,形成G-四联体,诱导金纳米粒子聚集,导致体系的共振光散射大大增强,体系最大RLS峰位于495.0 nm,且腺苷浓度为6.0×10-9～1.15×10-7 mol·L-1时,与体系共振光散射强度变化值呈良好的线性关系。该方法检测腺苷的检出限为1.8×10-9 mol·L-1,人工尿样分析的相对标准偏差分别为3.55%,4.37%,5.85%,加标回收率分别为96.3%,98.8%,103.4%(n=6)。该方法简便快速,灵敏度高,选择性好,准确度高,用于肺癌病人尿中腺苷的测定,结果与高效液相色谱法一致。本文第三章基于核酸适体结构开关偶联6-羧基荧光素和金纳米粒子作为荧光能量供受体对的荧光共振能量转移,建立了腺苷检测新方法。在20 mmol·L-1 Tris-HCl(pH = 7.4)缓冲液中,腺苷加入后的浓度为2.0×10-8～1.8×10-6 mol·L-1时,腺苷浓度与体系ΔF呈良好的线性关系。该方法测定腺苷的检出限为6.0×10-9 mol·L-1。分别把腺苷标准溶液加入选定的干扰物质混合溶液中,组成人工尿样,测定腺苷浓度,计算相对标准偏差分别为5.25%,3.64%,5.36%;腺苷测定的回收率分别为97.6%, 102.1%,105.8%。该方法准确可靠,已用于肺癌病人尿样中腺苷的测定,结果与高效液相色谱法一致。

全文目录

中文摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章前言  10-16
  1 研究意义  10-11
  2 核酸适体  11-14
  3 腺苷检测方法研究现状  14
  4 本研究工作的构思  14-16
第二章适体结构开关偶联金纳米粒子共振光散射法检测尿腺苷  16-27
  1 引言  16-17
  2 实验部分  17-18
  3 结果与讨论  18-26
  4 结论  26-27
第三章适体分子信标荧光共振能量转移法检测尿腺苷  27-37
  1 引言  27
  2 实验部分  27-29
  3 结果与讨论  29-36
  4 结论  36-37
参考文献  37-44
综述  44-56
已/待发表的论文  56-57
致谢  57

基于核酸适体的腺苷检测新方法及应用研究

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