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二苯乙烯苷对氧化损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB/IκB表达的影响

作　者: 崔慧辉
导　师: 田英；龙石银
学　校: 南华大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 人脐静脉内皮细胞二苯乙烯苷氧化损伤 NF-κB IκB TNF-α IL-6
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:研究二苯乙烯苷对H₂O₂诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,探讨TSG保护内皮细胞的作用机制。方法:对体外培养人脐静脉内皮细胞给予不同浓度H₂O₂刺激,MTT法筛选造成HUVEC氧化损伤的H₂O₂浓度,检测TSG对氧化损伤的HUVEC细胞活性的影响。用不同浓度的TSG预处理HUVEC 4h后,加200μmol/L H₂O₂作用24h,运用RT-PCR检测NF-κB、IκB、TNF-α、IL-6 mRNA表达,免疫印迹检测NF-κB、IκB蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测上清中TNF-α、IL-6蛋白表达。结果: MTT法筛选200μmol/L为H₂O₂损伤作用浓度,细胞增殖率结果显示,与H₂O₂（200μmol/L）损伤组比较,0.1、1、10μmol/L TSG加H₂O₂处理组细胞的增殖率都显著增加（P<0.01）。对炎症应答相关基因的初步研究显示,与H₂O₂损伤组比较,0.1、1、10μmol/L TSG加H₂O₂处理组NF-κB mRNA表达水平显著降低（P<0.01）,1μmol/L TSG加H₂O₂处理组蛋白表达有统计学意义;TNF-αmRNA及蛋白水平有不同程度降低,其中1μmol/L TSG加H₂O₂处理组mRNA表达显著降低（P<0.01）;各组IκB、IL-6 mRNA及蛋白表达差异无显著性。结论:TSG可能通过抑制NF-κB的活化而降低炎性因子的表达,保护HUVEC。

全文目录

英文缩写词索引  6-7
中文摘要  7-8
ABSTRACT  8-9
前言  9-11
1 实验材料  11-13
  1.1 材料  11
  1.2 主要试剂  11-12
  1.3 仪器设备  12-13
2 实验方法  13-21
  2.1 人脐静脉内皮细胞的培养  13
  2.2 二苯乙烯苷对氧化损伤HUVEC 细胞活性的影响  13-15
  2.3 细胞总RNA 的提取、定量和RNA 的完整性分析  15-16
  2.4 RT-PCR 检测NF-κB、IκB、TNF-α、IL-6 mRNA 表达  16-18
  2.5 Western-blotting 印迹法检测NF-κB、IκB 蛋白表达  18-20
  2.6 ELISA 法检测细胞TNF-α、IL-6 蛋白表达  20-21
  2.7 统计处理  21
3 实验结果  21-35
  3.1 二苯乙烯苷对氧化损伤HUVEC 细胞活性的影响  21-23
  3.2 二苯乙烯苷对氧化损伤 HUVEC NF-κB、IκB、TNF-α、IL-6 mRNA 表达的影响  23-30
  3.3 二苯乙烯苷对氧化损伤HUVEC NF-κB、IκB、TNF-α、IL-6 蛋白表达的影响  30-35
4 讨论  35-37
  4.1 二苯乙烯苷对氧化损伤HUVEC 细胞活性的影响  35
  4.2 二苯乙烯苷对氧化损伤HUVEC 核转录因子表达的影响  35-36
  4.3 二苯乙烯苷对氧化损伤HUVEC 炎性因子表达的影响  36-37
5 结论  37-38
参考文献  38-42
综述  42-51
在读期间科研成果简介  51-52
致谢  52

二苯乙烯苷对氧化损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB/IκB表达的影响

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