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神经损伤诱导的背根节神经元内分子表达的改变

作　者: 张明冬
导　师: 石铁军
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 背根节神经损伤神经元死亡高血糖
分类号: Q42
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

世界疼痛研究联合会将神经病理性疼痛定义为外周或中枢神经系统的感觉通路遭受损伤或者功能障碍而引起的疼痛。外周神经损伤因导致感觉神经元轴突退行性变化、胞体内基因表达的改变、神经元的死亡和神经元的再生等一系列变化而引起神经病理性疼痛发病。由于对神经病理性疼痛发病机制了解甚少,目前对这种临床慢性疼痛难以进行有效治疗。本课题利用从人类蛋白质图谱计划获得的797种抗体通过免疫组化和Western Blot对axotomy损伤1周后Sprague Dawley大鼠DRG内发生差异表达的蛋白质进行筛选;利用基于激光扫描共聚焦显微镜体视学技术对axotomy损伤1周和1个月的成年Bax KO和野生型小鼠L5 DRG进行神经元数目统计计数;以纯合子Ⅱ型糖尿病转基因鼠(BKS.Cg-m +/+ Leprdb/J, Leprdb)和杂合子对照小鼠(BKS.Cg-m +/+ Leprdb/J, mLeprdb100)为实验动物,利用体视学方法来检测高血糖对DRG感觉神经元数目的影响以及axotomy损伤对II型糖尿病转基因鼠DRG神经元数目的影响。实验结果表明ATF3,CECR5,LYN,UPF3B这四种蛋白质在axotomy损伤1周后SD大鼠损伤侧DRG中表达上调,而SCGN表达下降,尽管FRMD6,LRPAP1,NDUFS4,RAP1GAP这四种蛋白的免疫组化结果下调,但是Western Blot的结果显示它们的下降程度并不明显。Bax参与了axotomy损伤诱导的早期DRG神经元的死亡,随着损伤时间的延长,Bax介导的信号通路逐渐被其他细胞死亡途径所替代,DRG内的大型、中型和小型神经元对axotomy损伤诱导的神经元死亡并没有特殊的敏感性。长期高血糖可以导致II糖尿病转基因小鼠L5 DRG神经元的数目下降30%左右,并且主要集中在中型神经元,而axotomy损伤1周并没有增加神经元的死亡。了解外周神经损伤对DRG神经元内蛋白表达的改变和DRG神经元死亡的机制有助于加快对神经病理性疼痛发病机制的认识,从而为有效治疗神经病理性疼痛提供合适的作用靶点。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章绪论  8-18
  1.1 课题背景  8-13
  1.2 国内外研究进展  13-16
    1.2.1 高通量检测神经损伤诱导的DRG 基因表达的改变  13-14
    1.2.2 外周神经损伤诱导DRG 神经元的死亡  14-16
  1.3 研究内容和意义  16-18
第2章实验材料与方法  18-28
  2.1 试剂与器材  18-21
    2.1.1 主要实验试剂和配置  18-20
    2.1.2 主要实验仪器  20-21
  2.2 动物模型的建立  21-22
    2.2.1 坐骨神经轴索切断模型  21
    2.2.2 坐骨神经分支损伤模型  21-22
  2.3 免疫组织化学IHC  22-24
    2.3.1 普通免疫组织化学法（Normal IHC）  22
    2.3.2 TSA 免疫组织化学法  22-24
  2.4 Western Blot  24
  2.5 体视学技术  24-26
    2.5.1 DRG 体积  26
    2.5.2 DRG 神经元密度  26
  2.6 图像处理  26
  2.7 统计学分析  26-27
  2.8 本章小结  27-28
第3章 Axotomy 诱导DRG 蛋白表达的改变  28-34
  3.1 引言  28
  3.2 DRG 神经元中蛋白质的表达（IHC）  28-29
  3.3 Western Blot 验证DRG 神经元内蛋白表达的改变  29-32
    3.3.1 IHC 表达上调的蛋白质  29-30
    3.3.2 IHC 表达下调的蛋白质  30
    3.3.3 IHC 表达不变的蛋白质  30-32
  3.4 讨论  32-33
  3.5 本章小结  33-34
第4章 Axotomy 诱导DRG 神经元的死亡  34-46
  4.1 引言  34
  4.2 Bax 与DRG 神经元的死亡  34-37
    4.2.1 成年小鼠Axotomy 1 周和1 个月后DRG 神经元的数目  34-35
    4.2.2 神经损伤对L5 DRG 形态的影响  35-37
  4.3 Bax 在不同损伤模型中的表达  37-39
  4.4 Bax 转基因小鼠神经损伤后的自残现象（Autotomy）  39-41
    4.4.1 Axotomy 诱导Bax KO 小鼠的自残现象  39-40
    4.4.2 vGLUT2 与Autotomy  40-41
  4.5 Ⅱ型糖尿病高血糖下DRG 的表型  41-43
    4.5.1 高血糖对DRG 神经元数目的影响  41
    4.5.2 Axotomy 对Db/Db 和对照组小鼠DRG 形态的影响  41-43
    4.5.3 Erk1/2 磷酸化水平的改变  43
  4.6 讨论  43-44
    4.6.1 Bax 与Axotomy 诱导的DRG 神经元的死亡  43-44
    4.6.2 Bax 与Autotomy  44
    4.6.3 高血糖对DRG 神经元的影响  44
  4.7 本章小结  44-46
结论  46
展望  46-47
参考文献  47-52
攻读学位期间发表的学术论文  52-54
致谢  54

神经损伤诱导的背根节神经元内分子表达的改变

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