学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验研究

作　者: 宋淑敏
导　师: 刘铭；彭强
学　校: 泸州医学院
专　业: 外科学
关键词: 血管内皮祖细胞转染慢病毒绿色荧光蛋白
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 46次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：探索人脐带血血管内皮祖细胞(EPCs)分离、培养、扩增和鉴定的方法；探讨HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(GFP)基因转染血管内皮祖细胞的可行性和方法。方法：采用密度梯度离心法和贴壁细胞分离法相结合,分离和筛选出人脐带血内皮祖细胞,用EGM-2培养基培养、扩增,采用细胞免疫荧光染色和流式细胞仪检测内皮祖细胞表面标记CD133、CD34、VEGFR-2的方法鉴定实验培养的内皮祖细胞。取生长活跃的EPCs,以HIV-1来源的慢病毒为载体,以绿色荧光蛋白(GFP)基因为目的基因转染EPCs。感染复数MOI分别为：1：10,1：50,1：100,MTT法检测不同病毒滴度时细胞增殖情况,计算转染率；取1：50转染组与未转染的空白组进行对照,于转染后1-10天观察两组细胞增殖情况。用t检验、卡方检验、方差分析等方法对实验结果进行统计学分析,P<0.05有统计学意义。结果：单个核细胞经EGM-2培养基培养一周后,即分化成CD133、KDR和CD34阳性的EPCs。1:10转染和1：50转染后细胞增殖无明显影响,细胞显绿色荧光。1：10比率转染后48小时绿色荧光细胞比率仅(35.2±2.75)%；1：50比率转染后48小时荧光显微镜下观察转染率为(87.4±1.89)%,转染率高于1：10组(P<0.05)。1：50转染后的细胞继续培养并与未转染组对照,显示两组细胞生长曲线无明显差异(P>0.05)。1：100比率转染后,细胞的增殖处于停滞状态,镜下可见细胞坏死形成碎片。结论：1、采用密度梯度离心法和贴壁细胞分离法相结合,经EGM-2培养基培养扩增可从脐带血获得较高纯度和较大数量的EPCs;2、采用HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染标记血管内皮祖细胞是可行的；以MOI=1：50进行转染,对细胞生长影响小,转染效率高。

全文目录

1 HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验研究  3-29
  1.1 中文摘要  3-5
  1.2 英文摘要  5-7
  1.3 前言  7-9
  1.4 材料与方法  9-14
  1.5 结果  14-18
  1.6 讨论  18-24
  1.7 结论  24-25
  1.8 参考文献  25-28
  1.9 英汉缩略词对照表  28-29
2 致谢  29-30
3 血管内皮祖细胞促肿瘤生长研究进展(综述)  30-46
在读书期间发表的文章  46-47

HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文