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全反式维甲酸对人肺腺癌A549细胞株增殖及环氧化酶-2表达的影响

作　者: 秦艳
导　师: 邓述恺
学　校: 泸州医学院
专　业: 内科学
关键词: 肺癌 肺腺癌 全反式维甲酸 环氧化酶-2
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：通过体外研究维甲类化合物的衍生物——全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)对人肺腺癌A549细胞株的作用,探讨ATRA对人肺腺癌A549细胞株增殖及环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)表达的影响及其可能的机制。方法：(1)培养肺腺癌A549细胞：将肺腺癌A549细胞株接种在25ml培养瓶内,以含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,在5%CO2、37℃孵箱进行培养。(2)取对数生长期培养的肺腺癌A549细胞用于实验,按ATRA作用细胞的时间分为24小时,48小时和72小时三个时间段,每个时间段再按药物浓度分为1×10-7mol／L(第2组),1×10-6mol／L(第3组),1×10-5mol／L(第4组),1×10-4mol／L(第5组)四组药物浓度组和不加药的对照组(第1组)共5组,每组10个实验孔。待各实验浓度的药物作用细胞于各实验时间段后,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)进行测定,分别检测各实验组和对照组细胞的吸光度值,计算在各时间段各实验浓度药物对细胞的生长抑制率。(3)选择最佳的药物作用时间(72小时)和各实验药物浓度,用免疫细胞化学S-P(streptavidin-peroxidase)法测定细胞浆内COX-2的表达,培养同样时间不加药的细胞作对照组,比较实验组与对照组细胞浆内COX-2的表达是否有差异。(4)选择最佳的药物作用时间(72小时)和各实验药物浓度,用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定细胞上清液中COX-2的含量变化,培养同样时间不加药物的细胞作对照组,比较实验组与对照组细胞上清液中COX-2的含量是否有差异。(5)选择最佳的药物作用时间(72小时)和各实验药物浓度,用透射电镜观察细胞的形态变化,培养同样时间不加药的细胞作对照组,比较实验组与对照组细胞形态是否有差异。结果：(1)当不同实验浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞24小时后：1×10-7mol／L浓度组,1×10-6mol／L浓度组分别与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明此两浓度的ATRA作用细胞24小时后对细胞无明显的抑制作用；1×10-5mol／L浓度组,1×10-4mol／L浓度组分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明此两浓度的ATRA对细胞有明显的抑制作用；相邻各实验组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)；综上,用不同浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞24小时后,当达到一定的药物浓度时对细胞有抑制作用。(2)当不同实验浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞48小时后：1×10-7mol／L浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明此浓度的ATRA作用细胞48小时后对细胞无明显的抑制作用；1×10-6mol／L浓度组,1×10-5mol／L浓度组和1×10-4mol／L浓度组分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明这三个浓度的ATRA对细胞有明显的抑制作用；相邻各实验组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)；综上,用不同浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞48小时后,当达到一定的药物浓度时对细胞有抑制作用,且随着浓度增大抑制越明显。(3)当不同实验浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞72小时后：1×10-7mol／L浓度组,1×106mol／L浓度组,1×10-5mol／L浓度组,和1×10-4mol／L浓度组分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明各浓度的ATRA对细胞均有抑制作用；相邻各实验组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)；综上,用不同实验浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞72小时后,随着实验组浓度的升高,抑制作用愈加明显。(4)选择不同实验浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞72小时后,可见COX-2在细胞浆里的表达下降,并随着实验组浓度的升高,COX-2表达下降愈加明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),表明COX-2可能参与了ATRA对细胞抑制的过程。(5)选择不同实验浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞72小时后,各实验组均可见A549细胞上清液中COX-2的含量下降,并随着实验组浓度的升高,COX-2含量下降愈加明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),相邻各实验组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05),进一步表明COX-2可能参与了ATRA对细胞抑制的过程。(6)选择不同浓度的ATRA作用肺腺癌A549细胞72小时后,透射电镜下可见各实验浓度组的肺腺癌A549细胞表现为明显凋亡趋势,与对照组比较细胞形态明显不同。进一步说明ATRA的确对肺腺癌A549细胞有抑制作用。结论：ATRA可以抑制肺腺癌A549细胞的生长,并且其抑制细胞生长的机制可能是通过抑制细胞COX-2的表达而实现,为临床应用ATRA化学预防肺癌提供新的理论依据。

全文目录


1 全反式维甲酸对人肺腺癌A549细胞株增殖及环氧化酶-2表达的影响  3-51
  1.1 中文摘要  3-6
  1.2 英文摘要  6-10
  1.3 前言  10-12
  1.4 材料与方法  12-22
  1.5 结果  22-36
  1.6 讨论  36-43
  1.7 结论  43-45
  1.8 参考文献  45-50
  1.9 英汉缩略词对照表  50-51
2 致谢  51-52
3 肺癌的分子靶向治疗研究进展(综述)  52-66
附录  66-70

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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