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春剑和大花蕙兰种间杂交种子无菌萌发及杂交后代的RAPD分析

作　者: 鲁迪
导　师: 王永清
学　校: 四川农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 春剑 大花蕙兰 种间杂交 无菌萌发 杂交后代 RAPD标记
分类号: S682.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本研究以春剑‘翠仙’(Cymbidium longibracteatum ’cuixian’)、大花蕙兰‘黄金虎’(C. Moring Moon’Great Tiger’)、‘溪流’(C. hybridium Enzan Stream’Orpheus’)为材料进行种间杂交,对杂交种子进行非共生萌发试验,并运用RAPD分子标记对杂交Fl代进行分析。本研究的目的是通过兰属种间杂交方法培育出新的种质,并在分子水平上评价杂交后代特性,为春剑与大花蕙兰的杂交育种进行基础性的探索工作。主要研究结果如下。1.以春剑为母本,大花蕙兰为父本均能获得杂交果实,其中春剑‘翠仙’×大花蕙兰‘溪流’结果率最高,为78.5%；以大花蕙兰为母本,春剑‘翠仙’为父本,杂交结果率均为0；春剑为试材进行自交易于成功,结果率为100%。2.杂交种子无菌萌发的最适培养基为：MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+Tryptone 50mg/L+AC 1 000mg/L;原球茎增殖的最佳培养基为：1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5 mg/L+KT0.05mg/L,增殖系数为6.07;直径大小为0.3cm的原球茎最适宜增殖培养,增殖系数为6.10；培养基中添加150mg／L酵母浸膏,对原球茎增殖有明显促进作用；原球茎分化芽苗的最佳培养基为：MS+NAA0.1 mg/L+6-BA 2.0mg/L+Tryptone250mg/L +AC1.0g/L,分化率为88.33%；原球茎分化丛生芽的最佳培养基为：MS+NAA0.2mg/L +Tryptone250mg/L+TDZ1.0mg/L,丛生芽增殖系数最高为5.38；适合根形成与生长的培养基为：MS+AC1.0g/L和MS+NAA 0.1 mg/L+AC 1.0g/L,生根率为100%,平均根长2.4-2.54cm；获得根数最多的培养基为：MS+NAA0.1 mg/L+AC0.5g/L,平均根数2.06条／苗；采用混合基质(腐殖土：陶粒=5：1混匀)栽植,成活率达93.02%。3.用21个RAPD随机引物共扩增出180条复性好且清晰的条带,其中多态性DNA条带164条,占总带数的91.11%,平均每个引物产生8.57条带和7.81条多态性条带；杂交F1代偏向亲本大花蕙兰‘溪流’(X)遗传,与其相似性系数的变化范围0.7222-0.7722。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
前言  9
1 文献综述  9-17
  1.1 兰属植物杂交育种进展  9-14
    1.1.1 兰属植物育种的发展简史  10-11
    1.1.2 兰花的育种手段  11-14
  1.2 兰花种子无菌萌发研究概况  14-16
  1.3 RAPD标记技术在兰科植物中的应用  16-17
    1.3.1 RAPD标记技术简介  16
    1.3.2 RAPD标记在兰花分类、亲缘关系鉴定中的应用  16-17
    1.3.3 RAPD标记在兰花遗传多样性、品种鉴定研究中的应用  17
2 本研究的目的和意义  17-18
3 材料与方法  18-24
  3.1 春剑与大花蕙兰杂交种子无菌萌发体系的建立  18-22
    3.1.1 种间杂交试验  18
    3.1.2 春剑与大花蕙兰种间杂交种子的无菌萌发  18-19
    3.1.3 春剑×大花蕙兰原球茎增殖培养  19-20
    3.1.4 春剑×大花蕙兰原球茎分化培养  20-21
    3.1.5 生根与炼苗移栽  21
    3.1.6 数据统计与分析方法  21-22
  3.2 春剑与大花蕙兰及其杂交后代的RAPD分析  22-24
    3.2.1 材料与试剂  22
    3.2.2 方法  22-24
    3.2.3 数据统计与分析方法  24
4 结果与分析  24-37
  4.1 春剑与大花蕙兰杂交种子无菌萌发体系的建立  24-32
    4.1.1 春剑与大花蕙兰种间杂交试验  24-25
    4.1.2 春剑与大花蕙兰杂交种子无菌萌发  25-26
    4.1.3 原球茎增殖  26-29
    4.1.4 原球茎分化  29-31
    4.1.5 生根培养  31-32
    4.1.6 炼苗移栽  32
  4.2 春剑与大花蕙兰及其杂交后代的RAPD分析  32-37
    4.2.1 基因组DNA检测  32-33
    4.2.2 RAPD随机引物的筛选  33-34
    4.2.3 DNA扩增结果及多态性分析  34-36
    4.2.4 遗传相似性系数分析  36-37
5 讨论  37-42
  5.1 春剑与大花蕙兰种间杂交  37-38
  5.2 杂交种子的无菌萌发  38
  5.3 原球茎的增殖  38-39
  5.4 原球茎直接分化芽苗  39-40
  5.5 原球茎分化丛生芽  40-41
  5.6 生根培养与炼苗移栽  41
  5.7 春剑与大花蕙兰杂及其交后代的RAPD分析  41-42
6 主要结论与下一步研究工作的建议  42-45
  6.1 主要结论  42-43
  6.2 进一步研究工作的建议  43-45
参考文献  45-50
附图(PLATE)  50-51
致谢  51

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺（花卉和观赏树木） > 多年生花卉类 > 其他花卉类 > 兰科植物
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