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放射性碘原子标记hVEGF-siRNA的实验研究

作　者: 朱沭
导　师: 赵明
学　校: 华中科技大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 血管内皮生长因子 小干扰 RNA放射性碘 放射性标记
分类号: R817
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 8次
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内容摘要


目的:探讨放射性碘标记siRNA的方法,以期建立体内肿瘤显像、基因靶向和放射性靶向协同治疗体系。方法:设计人血管内皮生长因子小干扰RNA,通过RT-PCR和Western blotting验证其有效性。利用Bolton-Hunter试剂间接将人VEGF siRNA标记上放射性碘原子并通过3%琼脂糖凝胶电泳、电泳图谱自显影和高效液相色谱法验证。标记后的siRNA在37℃下与50%胎牛血清分别孵育24、48、72h后,通过20%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其血清稳定性。以甲醇和5%醋酸铵(1:1)混合液、丙酮和生理盐水(1:1)混合液为展开剂,131I标记后的siRNA分别点样于薄层层析硅胶板和新华一号滤纸,展开后放入薄层扫描仪扫描,测标记后siRNA放化纯。Lipofectamin2000介导碘标记hVEGF siRNA转染HepG2细胞,通过Real time PCR检测标记后siRNA生物活性。结果:设计并合成有效的人VEGF siRNA序列,并成功的利用Bolton-Hunter试剂标记上放射性碘原子。标记碘原子后的siRNA,具有良好血清稳定性和较高的放化纯(>80%)。不论是131I-siRNA还是127I-siRNA,其降解目的mRNA的活性不发生改变,标记过程不影响siRNA生物活性。同时,Lipofectamin2000在一定程度上还会降低VEGF mRNA表达。结论:放射性碘原子成功的标记人VEGF siRNA,为之后研究siRNA靶向转运、基因和放射性协同治疗奠定基础。

全文目录


中文摘要  5-6
Abstract  6-7
材料  7-9
  1 细胞株和 siRNA  7
  2 试剂  7-8
  3 仪器材料  8-9
方法  9-20
  第一部分 设计合成有效的人 VEGF siRNA  9-16
  第二部分 放射性碘标记人 VEGF siRNA  16-20
结果  20-26
  1 设计合成的hVEGF siRNA有效性验证  20
  2 ~(131)I标记  20
  3 HPLC  20-21
  4 标记后siRNA的稳定性  21
  5 ~(131)I-siRNA放化纯  21
  6 标记后siRNA生物活性  21-26
讨论  26-29
结论  29-30
参考文献  30-32
附件  32-35
综述  35-62
  参考文献  52-62
致谢  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 特种医学 > 放射医学 > 放射性同位素在医学上的应用
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